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『目的』牙髓干细胞的发现为实现牙再生修复奠定了基础。目前,研究牙再生的前提是如何分离、获得牙髓干细胞,而其表面特异性标记物的确定则足筛选、分离牙髓干细胞的关键。通过基因序列筛选发现,牙髓干细胞与骨髓干细胞表面标记物相似性>90%,已知Thy-1/CD90和Ringlb是两种骨髓间充质干细胞的表面标记物,在骨髓干细胞中呈阳性表达且对干细胞的增殖分化具有一定影响,然而,Thy-1/CD90和Ringlb是否也同样表达于牙髓干细胞表面?是否具备牙髓干细胞表面标记物的特性?对牙齿发育有无影响?是否可以作为牙髓干细胞的表面标记物?等等一系列问题成了牙髓干细胞相关研究中鲜有报道但却值得关注和探索的一个新方向。因此,本论文通过对Thy-1/CD90和Ring1b的筛选和鉴定,探索和研究Thy-1/CD90和Ring1b是否可以作为牙髓干细胞的候选标记物。『方法』本论文分为牙髓干细胞表面标记物筛选和鉴定两个部分。第一部分,通过原位杂交技术和流式细胞分选技术,研究Thy-1/CD90和Ringlb在牙髓组织中表达部位和数量的生物学特性,以对其作为牙髓干细胞表面标记物的特性进行筛选；第二部分为牙髓干细胞表面标记物的鉴定,又分为Thy-1/CD90和Ring1b对小鼠牙齿发育的功能鉴定和Thy-1/CD90和Ringlb阳性细胞的生物学特性鉴定。1.功能鉴定：利用Thy-1/CD90和Ringlb基因敲除小鼠作为模型,首先通过显微解剖的方法分离出胚胎小鼠正在发育的切牙和磨牙牙胚,进行体外器官培养,以正常的CD1小鼠为对照,观察Thy-1/CD90和Ring1b基因敲除后对体外培养的小鼠牙胚生长发育是否存在影响。此外,通过制作Thy-1/CD90和Ring1b基因敲除小鼠发育牙胚的组织切片,进行H-E染色,与CD1小鼠进行对比,观察在体内环境下Thy-1/CD90和Ring1b敲除后对小鼠牙齿发育的作用和影响。2.分选阳性细胞生物学特性鉴定：首先通过流式细胞分选技术分别收集Thy-1/CD90+细胞.Ringlb+、Thy-1/CD90+&Ring1b+细胞.以及BMSCs四组细胞,然后以BMSC为参照,采用克隆细胞形成率、细胞增殖OD值测定和生长曲线绘制,以及细胞表型的测定,鉴定Thy-1/CD90和Ringlb分选的阳性细胞是否具有与骨髓干细胞相似的干细胞生物学特性。『结果』第一分部结果显示,Thy-1/CD90和Ring1b通过免疫原位杂交后均阳性染色于小鼠P2、P5切牙根端的唇侧颈环区域,FACS检测结果显示Thy-1/CD90在全牙髓的表达为12.2%,在牙髓根部占31.5%,在近2/3的牙髓体部占2.8%；Ring1b的分选计数结果与之相近似,在全牙髓的表达为11.7%,在牙髓根部占28.6%,在近2/3的牙髓体部占3.1%。第二部分结果显示,经体外培养Thy-1/CD90、Ring1b基因敲除小鼠切牙牙胚后,发现在E14.5、E16.5、E18.5的Thy-1/CD90-/-和Ring1b-/-基因敲除小鼠其牙胚形态及体积方面均滞后于对照组的CD1小鼠牙胚,且.Thy-1/CD90-/-的发育最缓慢,而磨牙牙胚经体外培养后停止生长。H-E染色结果显示两个基因敲除组小鼠牙胚均有生长但都滞后于正常小鼠组的。最后,经FACS分选出的四组细胞,经克隆细胞形成率比较,四组CFU分别为0.68%、0.73%、0.59%和0.44%,BMSC组的克隆细胞形成率明显低于其它各组；MTT检测显示四组总的生长方式相近似,均为5天后进入快速增殖期,9-10天后逐步进入生长平台期,但BMSC组的增殖速度略低于其余三组。细胞表型检测结果显示：Vimtine、 CD44和SHH四组均为阳性表达,DSPP和DSP阴性表达。ON、FGF在Thy-1/CD90+细胞表面无表达,其余为弱阳性表达。BSP仅在BMSCs组细胞表面为强阳性表达,其余为阴性表达。『结论』1Thy-1/CD90和Ring1b均存在于并可阳性表达在牙髓细胞表面；2.Thy-1/CD90和Ring1b在牙髓细胞中的表达具有与牙髓干细胞表面标记物相近似的表达特性；3Thy-1/CD90和Ring1b基因敲除后对小鼠牙胚的生长发育具有定的抑制作用,因此认为Thy-1/CD90和Ring1b对小鼠牙齿发育功能具有一定的影响；4.Thy-1/CD90+/Ring1b+细胞以及Thy-1/CD90+&Ring1b+细胞具有与骨髓干细胞相似的生物学特性；5.Thy-1/CD90口Ringlb具有牙髓干细胞表面标记物的相关特性,可作为牙髓干细胞的候选生物标志。