保护剂在动物疫苗中具有重要的作用,直接影响疫苗的质量。目前,动物疫苗中,灭活疫苗占相当大的比例,国内外广泛使用的口蹄疫(FMD)疫苗均系油乳剂灭活疫苗。国内常用的保护剂主要为牛奶、蔗糖、明胶等,组方简单,保护功能差。加上国外对疫苗保护剂研究的保密,使成品疫苗的保存和运输受到一定限制。为延长FMD疫苗的有效保护期,提高疫苗的免疫效力,本研究对FMD灭活疫苗保存技术进行了初步探讨。主要的研究内容和结果如下:1.用三因素、三水平、双重复正交试验筛选出了对口蹄疫病毒(FMDV)抗原保护效果最好的4#保护剂配方,通过方差分析4#保护剂保存病毒在37℃静置40hr和50hr测得TCID50极显著的高于1、3、5、6、7、8号,显著高于2、9。其中最主要的三种保护剂:海藻糖、山梨醇、PVP配方比例为8:5:4,保护剂与病毒配比为1:6时即可达到最佳保护效果。经146s抗原含量测定,加4#保护剂的病毒分别于-20℃和4℃下保存150d, 37℃下保存40hr,测得结果分别为1.116μg /ml、0.896μg /ml、0.888μg /ml,进一步验证了4#保护剂对病毒具有良好的保护效果。2.将加入4#保护剂O/NX/99其细胞毒,在20oC放置30d后,使用RT-PCR扩增和核苷酸序列分析技术,分析了VP1基因,并与未加保护剂的对照病毒进行了比较,结果保护剂不会使病毒基因发生突变。3.由于筛选的4#保护剂配方中主要组分海藻糖、山梨醇、PVP的含量会影响疫苗乳剂的稳定性,本试验对该保护剂配方进行了优化。通过对疫苗乳液的物理性状评价,三种主要的保护剂海藻糖、山梨醇、PVP的含量对疫苗乳液的稳定性都有极显著的影响,PVP(聚乙烯吡咯烷酮)随含量的增加疫苗乳液的稳定性降低,海藻糖和山梨醇对疫苗乳液的稳定性影响较小,通过正交试验和相关数据的分析,优化后的复配比例为海藻糖:山梨醇:PVP=4:5:1。将优化后的保护剂加入病毒抗原后配制疫苗,并将该疫苗在20oC下放置15d后,免疫豚鼠。经微量细胞中和试验测定,豚鼠于免疫后14d、28d、42d的血清抗体效价分别为1.50、1.96、1.31。表明将优化的4#保护加入病毒抗原后的免疫效力明显高于优化前疫苗的免疫效力。