目的建立一种理想的体外共培养胚胎着床模型,研究不同浓度的雌二醇(E2)、孕酮(P4)和肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)的刺激对子宫内膜上皮细胞整合素β3及其配体骨桥蛋白表达的影响,以及对共培养模型粘附和铺展能力的影响,初步探讨该模型在胚胎粘附-植入方面的多因素调节。方法1、建立RL95-2-BeWo共培养体外着床模型将人子宫内膜癌细胞株RL95-2制成单层细胞用于模拟子宫内膜上皮,通过无血清培养和低吸附培养皿将人绒毛膜癌细胞株BeWo制成球状体用于模拟胚胎,将两者共培养模拟胚胎着床过程,观察形态并计算球状体粘附率(本实验以在澳大利亚亨利王子研究所PHI培训期间所做的球状体形态和粘附率作为对照)。2、多因素调节RL95-2-BeWo共培养体外着床模型粘附-植入功能：(1)粘附因子整合素β3及其配体OPN检测通过间接免疫荧光技术检测RL95-2单层细胞、BeWo单层细胞和BeWo球状体整合素β3及OPN的定位表达；用不同浓度的E2、P4、E2+P4及HB-EGF处理RL95-2细胞,通过实时定量PCR技术比较各组整合素β3及OPN的mRNA表达水平。(2)粘附实验和铺展实验用不同浓度的E2、P4、E2+P4及HB-EGF处理RL95-2细胞后与BeWo球状体共培养,比较各组球状体粘附率；用高浓度E2、P4及HB-EGF分别处理RL95-2细胞后与BeWo球状体共培养,第1h和第24h时拍照并测量球状体的直径,比较各组球状体铺展倍数。结果1、建立RL95-2-BeWo体外共培养模型,本实验组改良方法制备的BeWo球状体与PHI在形态和粘附率上无明显差异(P>0.05)。2、整合素β3和OPN在RL95-2单层细胞、BeWo单层细胞和BeWo球状体的细胞质和膜表面表达。3、E2对RL95-2细胞的整合素β3和OPN mRNA的表达无明显影响(P>0.05)；高浓度P4上调OPN mRNA的表达,低浓度P4明显抑制OPN mRNA的表达(P<0.05)；雌孕激素联合应用与各自单独应用无明显差异(P>0.05)；高浓度HB-EGF能够促进整合素β3(P>0.05)和OPN mRNA (P<0.05)的表达。4、高浓度E2抑制BeWo球状体粘附(P>0.05),高浓度P4促进球状体粘附(P>0.05),高浓度HB-EGF明显增加球状体粘附(P<0.05)；高浓度P4和HB-EGF明显促进球状体在RL95-2单层细胞上的铺展(P<0.05),并与作用时间有关。结论1、成功建立了RL95-2-BeWo共培养体外着床模型。2、整合素p3和OPN表达于RL95-2细胞和BeWo球状体的粘附接触面,其在子宫内膜细胞的表达受多因素调节。3、高浓度E2不利于胚胎粘附,高浓度P4和HB-EGF能促进胚胎粘附和植入。