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本文对玉米SOD的提取及其对酒精发酵的影响进行了研究,在不影响酒精发酵的前提下,提取得SOD酶制剂,抵消酒精生产过程的成本。 从玉米整粒中提取SOD的最佳工艺条件为:用玉米质量2倍的0.05mol/L磷酸缓冲液40℃浸泡玉米36h,淋干后再加入相同量的0.05mol/L磷酸缓冲液破碎后浸提1h,离心得SOD提取液;然后添加硫酸铵至40%饱和浓度除去杂蛋白,再添加硫酸铵至90%饱和浓度盐析,SOD冻干粉的比活为168.3U/mg蛋白。将提取SOD后的玉米残渣进行酒精发酵,淀粉出酒率为53.51%(95%v/v),原料出酒率为33.82%(95%v/v)。证明玉米SOD提取不影响酒精发酵,但淀粉损失较多。 胚芽虽只占玉米质量的11.86%,但其SOD的含量为提取SOD的60%左右,若以U/g所含比活计算,胚芽与胚乳的比值达到了10.79。因此,选择从玉米胚芽中提取SOD,并将提取SOD后的胚芽残渣与胚乳一起进行酒精发酵。从玉米胚芽提取SOD的最佳工艺条件为:用玉米质量2倍的0.05mol/L磷酸缓冲液40℃浸泡玉米36h,淋干后分离胚芽与胚乳,再加入胚芽质量2倍的0.05mol/L磷酸缓冲液破碎后浸提1h,离心得SOD提取液;然后添加硫酸铵依次到40%和90%进行除杂蛋白和盐析,离心后将沉淀冷冻干燥即得到SOD粗酶制剂,其比活为334.6U/mg蛋白。将分离后的胚乳和提取SOD后的胚芽残渣进行酒精发酵,淀粉出酒率为53.10%(95%v/v),原料出酒率为35.19%(95%v/v)。因此,从胚芽提取SOD淀粉损失较少,对玉米的利用更合理。 SOD粗酶液经硫酸铵分级沉淀、DE-52纤维素柱层析和Sephadex G-75层析法分离纯化,SOD比活最终可达到3583.3U/mg蛋白。经鉴定,玉米SOD为Cu,Zn-SOD,Cu和Zn原子含量之比约为5,在260nm处出现最大的吸收峰值。用SDS-PAGE法测得SOD亚基相对分子质量为18,800,即玉米SOD相对分子质量为37,600。同时,实验证明玉米SOD热稳定性较好,在pH7~8较稳定。