MUC1粘蛋白因其在多种腺癌包括乳腺癌、卵巢癌、肺癌等细胞上的高度异常表达使其成为肿瘤诊断和治疗的有效靶点。研究发现,腺癌患者尤其乳腺癌患者外周血中MUC1的水平较正常人高。其水平升高可以作为肿瘤辅助诊断指标。但目前因方法各异,在临床上尚未形成一种成熟的敏感特异的技术手段,而国外研发商业化生产的双抗体夹心ELISA法(CASA test)对腺癌的检出阳性率较低。本研究为检测肿瘤患者外周血中MUC1蛋白水平,建立一种更加敏感的双抗体夹心ELISA技术。首先构建pGEX- MUC1和pMAL-MUC1两种表达载体,转化大肠杆菌,通过IPTG诱导MUC1-GST及MUC1-MBP融合蛋白在大肠杆菌中的表达;经Glutathione Sepharose 4B亲和层析和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳纯化MUC1-GST融合蛋白,通过Amylose Resin亲和层析纯化MUC1-MBP融合蛋白,经Western blot鉴定蛋白的正确性;然后,将纯化的MUC1-GST和MUC1-MBP融合蛋白分别免疫家兔和大鼠,制备两种抗人MUC1多克隆抗体。最后,通过不同组合筛选合适的一级抗体、二级抗体及标准品,建立MUC1蛋白的双抗体夹心ELISA检测方法,采用双抗体夹心ELISA方法检测乳腺癌患者血清中MUC1蛋白含量。本研究所建立的双抗体夹心ELISA检测血清中MUC1的方法,具有简便、快捷、敏感性强及检出率高等优点,可望发展成为临床上检测腺癌的一种常规试剂盒。