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目的探讨魟鱼骨素(RCE)对人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖抑制作用及促进此癌细胞株凋亡的作用,观察细胞在不同药物浓度及作用时间下的增殖曲线,摸索出最佳的药物浓度及处理时间,观察其与细胞周期中的某些周期蛋白的关系,经过进一步筛选探索出作为细胞周期的正负调控因子细胞周期蛋白D1和p21,观察其异常表达,研究其可能存在的内在分子生物学机制。方法MCF-7培养于含10%的新鲜胎牛血清及100U/ml青-链霉素的RPMI-1640培养液中,置37℃下5%CO2培养箱。每2~3d换液1次,3~5d传一代,使用胰酶消化传代。分别加入终浓度为2.5、5、10、20、40μmol/L的RCE处理人乳腺癌细胞MCF-7不同时间即24h、48h及72h,使用96孔板培养,每组设五个复孔,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)进行染色,酶联免疫标记仪检测各组MCF-7细胞吸光度,绘制增殖曲线,摸索适合后期实验的最佳作用浓度及时间;流式细胞仪(FCM)检测采用IP染料单染所得的细胞周期DNA分布图,观察RCE作用前后对细胞周期的影响,采用双染细胞检测试剂(AnnexinV-FITC/IP)进行双染所得正常细胞、死亡细胞、发生程序性死亡细胞的分布图,观察RCE药物作用前后发生程序性死亡的细胞所占的比例,从而判定其促凋亡作用; Western blot(WB)检测RCE药物作用前后作为细胞周期的正负调控因子cyclin D1及p21表达的异常变化。结果MTT检测结果显示只有在一定浓度及时间范围内RCE对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用呈浓度依赖性和时间依赖性(p<0.05)。RCE具有最大抑制浓度10μmol/L和最佳作用时间48h。FCM检测结果发现随着10μmol/L浓度的RCE作用时间延长,流式细胞仪检测发现随着RCE作用时间的延长S期细胞百分比明显增加(p<0.05)而G2/M期细胞比例明显减少(p<0.05),而且凋亡细胞占所有检测细胞的比例随RCE作用时间的延长表现为明显升高(p<0.05);WB检测结果表明随着10μmol/L浓度的RCE作用时间延长,人乳腺癌细胞MCF-7中的cyclin D1表达量逐渐降低,p21蛋白表达量逐渐增强(p<0.05)。结论1、RCE具有抑制人乳腺癌细胞MCF-7分裂增殖的能力,这种抑制此癌细胞株增殖的能力存在最大抑制浓度c=10μmol/L和最佳作用时间t=48h;2、RCE具有促进人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的作用;3、RCE能阻滞细胞从DNA合成期向DNA合成后期转化,将细胞阻滞在DNA合成期。4、分析其分子生物学机制与cyclin D1低表达和p21过表达有一定关系。