香蕉(Musa spp.)体内草酸钙针晶体的生物矿化机制

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:kaixin314159
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
植物中的草酸钙晶体在特化细胞(晶异细胞)内的形成,是一种基本的、重要的生理代谢过程。不同植物草酸钙晶体在形态或结构上存在多样性和种间专一性;同一种植物中的草酸钙晶体往往具有特定的尺寸和形貌,并且成核后晶体的生长和晶异细胞的发育间存在显著的协同作用,这些事实均表明草酸钙的生物矿化不是一种随机的化学结晶过程,而是受到生物大分子(蛋白、多糖、糖蛋白等)的精确调控。被塑造的矿化相在特定的膜包覆空间内经历了不同的生物化学途径,最终形成热力学稳定的晶相。生物体通过复杂的分子和生物化学机制调控生物矿化的形成,尤其是通过生物矿物内部的有机基质调控晶体的形貌和晶相。目前,虽然有一些关于植物体内促进晶体成核的基质蛋白的报道,但对香蕉(Musa spp.)晶异细胞内草酸钙针晶体的形成机制仍然不清楚。本文除介绍香蕉假茎中针晶异细胞和针晶体的形态和结构特征,钙对针晶体的调控机制外,主要研究针晶体生长过程的有机基质调节机制以及体外模拟相关生物分子对草酸钙结晶动力学过程的调控等,以期揭示植物体内草酸钙的生物矿化机制。获得的主要结果如下:(1)香蕉(Musa spp.)中针晶体的形态特征及分布在香蕉(Musa spp.)的假茎气腔中沉积针晶体的细胞通常是特化的晶异细胞。晶异细胞包含成束(200根以上)的草酸钙针晶体。借助高分辨场发射扫描电镜的观察发现单根针晶体为锥形六棱或八棱晶(宽约4μm,长约150/μm)。X-射线衍射、傅里叶转换红外光谱、热失重及差热分析和拉曼光谱分析显示单根针晶体的晶相为一水合草酸钙(Calcium Oxalate Monohydrate, COM)。巴西蕉和泰国蕉来源于不同的国家但基因型相同,针晶体分布和晶体大小等特性相似,表明物种间遗传的稳定性。(2)Ca2+介导的Musa中针晶异细胞的形成借助钙离子微电极的非损伤微测技术测定晶异细胞内外钙离子流时发现,钙离子的外流仅为正常薄壁细胞的1/8,表明晶异细胞对钙离子具有明显的高吸收低外排。此外,针晶异细胞和针晶体的大小随钙离子浓度的升高而增加,表明针晶体和晶异细胞是协同生长的,并且钙离子能够调控针晶体的生长。(3)与针晶体相连的有机基质借助纳米级分辨的二次离子质谱技术,原位探测针晶体的元素分布时发现在针晶体外表面存在16O-和12C14N-二次离子,表明单根针晶体被一层有机膜所包覆(此膜可被丙酮所溶解,即定义为MA (Acetone-Soluble Matrix)。此外,在原子力显微镜(AFM)下发现针晶体内存在自组装蛋白丝(直径约为9 nnm),此有机基质可溶于甲酸,故定义为MF (Formic Acid-Soluble Matrix)。经LTQ-ESI-MS/MS确定MF蛋白的分子量为14 kDa。蛋白的C末端高度保守,且保守区域与一个细菌(Thermoplasma acidophilum DSM 1728)的伴侣蛋白chaperone protein DnaJ相似。C末端的11个氨基酸具有双亲性并富含脯氨酸(11-mer proline-rich peptide, PRP)且以无规卷曲的结构存在。(4)针晶体内自组装的纳米蛋白丝模板诱导伸长的草酸钙晶体的形成化学合成的11-mer PRP在离体条件下也可自组装形成微米长的丝状结构,并可在其表面诱导形成伸长的草酸钙晶体。成核实验表明低浓度的11-mer PRP可促进草酸钙的成核,成核后形成的晶体与对照相比显著地伸长。与成核结果不同,AFM下原位直接观测表明11-mer PRP并不影响草酸钙(-101)和(010)晶面生长的动力学过程以及台阶形貌。(5)柔韧性草酸钙针晶体的自组装AFM下原位溶解单根针晶体时发现六边形针晶体的(100)晶面上存在规则带状结构(宽约130nm),每条带由直径约130 nm的纳米球组成,而每个纳米球由四个65nm的小球构成。单根针晶体的断裂面厚度与带状结构的宽度(130 nm)接近。结合所有AFM下的原位观察结果得出埋藏在针晶体内的自组装蛋白丝调控纳米粒子有序堆砌,即纳米球围绕中心蛋白丝整齐排列并融合形成厚度相同的片层结构,这些片层结构垂直于蛋白丝长轴,最终形成锥形六棱针晶体。(6)专一性吸附抑制草酸钙的成核和生长通常与草酸钙生物矿化相关的蛋白含有磷酸化位点。选取已报道的与植物草酸钙形成有关的收钙素(Calsequestrin, CS)蛋白并合成了相关短肽CS-1和它磷酸化的对应体(1))CS-1。体相成核实验表明(p)CS-1与CS-1相比,能够显著抑制草酸钙晶体的成核并改变晶体形貌。原位AFM直接观察也证实了(p)CS-1比CS-1对(-101)面台阶生长动力学和形貌影响更明显,这表明带负电的磷酸根和带正电的(-101)面的静电作用更强,从而提高了蛋白与晶面的吸附,进而显著地抑制草酸钙的生长。综上所述,香蕉体内草酸钙针晶体形成机制的揭示,有助于理解在钙或草酸过剩的条件下,植物如何调控钙或草酸在有限的空间内形成独特形态和结构的针晶束,避免过高浓度的钙或草酸对植物造成伤害,使之适应环境并得以生存。
其他文献
背景和目的天然的骨组织本质上是复杂的有机/无机复合物,有着显著的机械性能,高强度、高韧性。这些优越的性能归结于有机物和无机物的结合以及它们独特的具有严格等级的空间结构,即以有机胶原纤维支架为矿化模板,纳米羟基磷灰石有选择性的沿着胶原纤维长轴c轴定向沉积在胶原纤维内部。人们一直尝试以生物仿生(biomimetics)的思路,即通过体外模拟骨组织的形成过程,来合成骨替代材料。理想的骨替代材料应该具有和
学位
鱼腥蓝细菌PCC 7120是一种丝状多细胞蓝细菌。其菌丝上的营养细胞通过光合作用进行碳素同化。而在缺乏化合态氮源的条件下,菌丝上约15~20%的营养细胞分化出行使生物固氮功能的异形胞。异形胞将固定的氮源传递给邻近的营养细胞,而营养细胞则将固定的碳源输送给异形胞,二者协调工作以维持菌丝的正常生长。光合作用、固氮作用、细胞分化、细胞交流以及胁迫应激这些生理活动需要精密而复杂的信号转导网络来实现。蛋白激
学位
目的:研究AF1q在结直肠癌细胞系及肿瘤组织中的表达情况,探讨AF1q的表达与结直肠癌发生的相关性。方法:1.通过RT-PCR、免疫组化方法比较AF1q在结直肠癌组织及癌旁组织中的表达情况及其与临床病理资料的关系。2.利用癌症基因组图谱在线数据库(The Cancer Genome Atlas,TCGA)进行生存分析,探讨AF1q与结直肠肿瘤的预后关系。3.通过RT-PCR及Western Blo
学位
先天畸形或后天疾患(感染、恶性肿瘤、外伤等)常造成膀胱壁的大部分、甚至整体的丧失。临床上现常规利用胃肠道行膀胱替代,从胃到直肠的各段消化道均被人们尝试用于新膀胱或尿流输出道的构建。然而由于胃肠粘膜分泌与吸收等难以克服的因素引起的并发症,增加了患者的痛苦。随着再生医学的兴起,组织工程膀胱替代成为了研究热点。组织工程修复缺损膀胱主要有两种方式:单纯支架修复和种子细胞复合支架修复。单纯生物材料技术经常会
学位
离轴-条状共焦非稳腔在大功率的固体和气体激光器件中有着广泛的应用,其输出模式的空间分布特性一直是研究的热点之一。但腔内本征模式的激励方式以及与之相关的输出线宽问题却很少被提及。过量噪声是非厄米光学系统中光场本征模式的一种重要特性,用于描述模式之间的耦合特性,其数值大小表示“实际线宽”对“极限线宽”(由Schawlow-Townes公式预测)的展宽倍数。本文针对条状离轴共焦非稳腔的具体几何结构,提出
学位
第一部分cAMP诱导的垂体腺瘤GH3细胞增殖与其下游效应分子PKA和Epac的关系及Epac对GH3细胞增殖的影响目的验证cAMP激活对大鼠垂体腺瘤GH3细胞增殖的影响,探究其下游效应分子PKA和Epac在其中发挥的作用,证实Epac与GH3细胞系增殖之间的关系方法首先采用CCK8法,研究cAMP激活剂Forskolin及PKA和Epac的抑制剂对GH3细胞增殖的作用。然后以Epac特异性激活剂8
学位
分子进化是从分子水平上追溯生物演变的轨迹,重建其类缘关系。从结构的角度来探讨分子进化的问题近年来逐渐受到人们的关注。 碳酸酐酶(Carbonic Anhydrase, CA)广泛分布于自然界,是一种很古老的含锌金属酶,双向催化二氧化碳的可逆水合反应,与人类健康密切相关,具有重要的生理作用,其不同的同工酶已成为不同疾病的重要靶点。 考虑到蛋白质结构在分子进化过程中表现得比序列更为
学位
大电导、Ca2+激活的K+通道(即BK通道)广泛分布在哺乳动物的平滑肌、骨骼肌、血管、脑、胰腺、膀胱等器官和组织,在神经递质释放、激素分泌、肌肉收缩、血流等许多生命活动中发挥着重要的生理作用。研究表明,BK通道不仅受到多个辅助性亚基的调控,还可以与其他通道蛋白尤其是钙离子通道形成功能性复合体,这是BK通道在不同组织中功能多样性的物质基础。本文通过分子生物学、电生理技术、免疫共沉淀、免疫荧光、光敏定
学位
目的:核磷蛋白是一种具有多种生物学功能的磷酸蛋白,广泛存在于细胞核内,不断穿梭于核仁、核质和胞浆之间。约1/3的急性髓系白血病(AML)患者存在NPM1突变,突变的NPM1蛋白异常聚集于胞浆,是NPMc+AML(NPM1突变型AML)发病的重要原因。鱼藤素是从植物中提取的具有抗肿瘤作用的天然单体药物。本文体外实验部分研究鱼藤素(deguelin)对NPMc+AML原代细胞的诱导分化作用,体内实验部
学位
第一部分Nup98在急性病毒性心肌炎病人CD4+T细胞中的表达背景:急性病毒性心肌炎(AVMC)的是由病毒感染引起的心肌炎症性疾病。我们和国外的研究证实Th17细胞是介导AVMC进展的重要细胞。近些年核孔蛋白的作用越来越为大家所重视,Nup98是一种与病毒感染和细胞分化相关的重要核孔蛋白。但Nup98在AVMC病人CD4+T细胞中表达情况尚未阐明。方法:本研究招募2014年6月至2015年1月期间
学位