金鱼和鲫PTX3基因的克隆、表达及功能的初步研究

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金鱼是由我国野生鲫演变而来的一类观赏鱼类,头瘤类金鱼是其众多品系中重要的一类。头瘤类金鱼的观赏价值和经济价值受头瘤形状、大小和颜色等的影响,然而其头瘤的产生机制尚不清楚。目前的研究普遍认为头瘤是组织的异常增生。最近的研究发现,随着头瘤的发生,PTX3(Pentraxin 3)基因的表达水平上调,证明PTX3在金鱼头瘤发生过程中可能发挥着重要作用;而PTX3在哺乳动物中发挥着类抗体、结合特定病原菌、激活并调控补体等免疫相关作用。因此我们推测,在头瘤的异常增生过程中,PTX3可能作为免疫相关因子对其发挥持续免疫的作用。为验证这一推论,我们对鱼类中的PTX3开展了相关研究。主要研究结论如下:1.PTX3在基因结构和蛋白结构上具有保守性。金鱼和异育银鲫PTX3基因均由3个外显子和2个内含子构成。金鱼的两个内含子分别长945bp,1519bp;异育银鲫的两个内含子分别长970bp,1513bp。金鱼和异育银鲫PTX3基因c DNA序列全长分别为1918bp,1560bp,均包含了一个1362bp的开放阅读框,编码453aa的蛋白质。预测的PTX3蛋白由信号肽(1-22aa)、氨基端(23-240aa)和PTX结构域(241-453aa)三部分构成,在PTX结构域有一非典型的Pentraxin信号(HICAVWSS)。两种鱼类编码的PTX3氨基酸序列高度同源,仅有两个氨基酸不同。2.PTX3在异育银鲫各组织中均有表达,在脑和肌肉中的表达量最高。在嗜水气单胞菌感染后,PTX3在肝脏、脾脏、头肾、肠和血液等鱼体的主要免疫器官和组织中均出现显著的表达上调。这一结果表明PTX3与鱼类免疫相关。3.PTX3体外功能实验证明,PTX3不具有细菌抑制活性,但具有细菌结合活性,这一结合在PTX3氨基端区域和PTX结构域均可发生。
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