CD40是分子量48KD的细胞表面分子，表达于许多类型细胞中，包括B细胞、树突状细胞、单核细胞、内皮细胞以及一系列肿瘤细胞。CD40为Ⅰ型跨膜糖蛋白，其基因定位于20q11-2g13-2，属肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员。CD40分子的天然配体CD40L(又称gp39)主要表达于活化的CD4~+T辅助(Th)细胞。CD40L-CD40相互作用是特异性免疫应答及其调节过程中主要的协同刺激信号。大量的研究表明，CD40分子可以介导B细胞的增殖、分化、抗体分泌及其类型转换，树突状细胞的激发及分化成熟，内皮细胞粘附分子的改变，炎症因子的释放以及白细胞在炎症部位的聚集等，是近年来倍受重视的膜型细胞因子。 我们以高表达CD40分子的人多发性骨髓瘤细胞株XG2为免疫原，应用杂交瘤细胞融合技术，研制出国内首株持续分泌特异性鼠抗人CD40单克隆抗体细胞株，命名为5C11。并采用抗CD40激发型单抗(克隆5C11)与LCD32共培养体系中，加入IL-4及其它细胞因子，组成CD40培养系统，能使人静止期B细胞在体外长期生存和增殖，为体外研究B细胞发育分化提供有效的手段。继而，我们发现抗CD40mAb 5C11能单独诱导外周单核细胞来源的树突状细胞(DCs)的扩增和分化成熟，在联合IL-4和GM-CSF时，扩增可达2—3倍。扩增的DCs具有成熟的标志及激发T细胞的功能。这一发现为体外大规模扩增可用于治疗的DCs提供了重要手段。在以上工作的基础上，本研究进一步探讨了CD40分子在恶性B淋巴细胞中的表达，并研究了CD40分子的激发对恶性B淋巴细胞生物学行为的影响，主要在以下三方面取得进展：m叨信号对恶性B淋巴细胞生物学行为的影响及其机制 摘要 一、CD40分子激发介导恶性B淋巴细胞凋亡，并提高肿瘤细胞株对什n皎疗敏感性 B淋巴细胞恶性肿瘤，如慢性B淋巴细胞性白血病、恶性B淋巴瘤及多发性骨髓瘤通常均表现为进行性病变及多器官受累。随着化／放疗手段的提高，大约60～70％的此类患者能获得不同程度甚至完全的缓解，但耐药的肿瘤残余细胞仍可能导致相同疾病的复发。因此亟需新的能够阻断残余肿瘤细胞增殖的治疗手段。在本研究中，我们分析了化疗药物地塞米松及常用的放疗手段一钻60Y射线联合CD40单抗对CD40分子表达阳性的XGZ和Daudi细胞株的促凋亡作用。XGZ为几－6依赖性人多发性骨髓瘤细胞株，Daudi为B淋巴瘤细胞株。这两株细胞对地塞米松和Y射线均具抗性，10”’mol／L的地塞米松或 10Gy的 Y射线仅引起小部分的细胞生长抑制和凋亡。5Cll引起 XGZ生长抑制和部分凋亡，其作用机制主要是使 XGZ不进入细胞周期，即处于GI期而最终死亡，这与XGZ撤除IL－6培养而发生的凋亡作用是类似的；同时，这两种情况下均未引起XGZ凋亡调节基因BclZ和Bax的变化。与此不同的是，SCll处理后的 Daudi发生细胞周期 GZ／M期阻滞，但并不介导凋亡。如果预先加入抗 CD40单抗处理，则能显著增加 XGZ和 Daudi对地塞米松和 Y射线诱导凋亡的敏感性。同时，CD40单抗处理后的 Daudi细胞 BclXL IlinlnA表达提高，BclXL／Bax比率亦增加，这推测可能与Daudi细胞在CD40单抗作用下仅产生细胞周期GZ／M期阻滞而未发生凋亡有关。CD40激发后的XGZ细胞株，BaxmMA表达增加，而 Bcl－XL m叫A变化不明显，因而导致 Bcl－XL／Bax比率降低。这些结果表明，CD40信号途径、地塞米松作用途径和Y射线作用途径，三者在凋、亡调节基因的表达与调控水平上发生整合，并可能通过直接改变bclXL／bax复合体的形成而最终决定细胞凋亡或存活。因此，以上结果进一步显示 SCll具有潜在的抗肿瘤运用价值。 二、CD40分子激发诱导淋巴母细胞自身融合并形成多核的类RS细胞 CD40分子属肿瘤坏死因子受体家族成员，是CB淋巴细胞发育分化过程中重要的抗原分子。柯杰金病的临床诊断以在组织或骨髓找到双核或多核的RS细胞为依 －2．m叨借号对厄性8淋巴细胞主物学行为的影响及其机制 摘要据。一系列研究证实，RS细胞表达功能性CD40分子，同时应用单细胞PCR技术亦己发现RS细胞存在免疫球蛋白基因重排现象，因而证实RS细胞来源于生发中心。但RS细胞来源于何种状态的生发中心细胞及其形成的机制尚不清楚。本研究首次发现一种基于CD40信号激发后介导的细胞融合现象，推测可能与RS细胞的形成有相关性。我们以淋巴瘤Daudi细胞株和多发性骨髓瘤细胞株XGZ为模型，其中Daudi为典型的淋巴母细胞因而对应于生发中心的B淋巴母细胞，而XGZ则对应于后生发中心期的 B细胞即浆细胞期。用抗 CD40单抗 SCll刺激以后 72h，我们在Daudi细胞培养体系中观察到了多核的大细胞（Gian cells），而这种现象在 XGZ细胞呈于同样条件下则没有呈现，虽然Daudi和XGZ细胞在CD40激发后24h都可发生同源性聚集。进一步用透射电子显微镜观察到了这种大细胞，它们大多数有3～10个细胞核，细胞膜完整；而＊＊2细胞则发生了细胞间“紧密连接”。在＊一山中形成的多核大细胞表达 CDI la、CD18、CD54、CD58、CD80和 fas等，具有与柯杰