降胆固醇微生物的筛选鉴定和胆固醇降解酶的分离纯化

来源 :天津商学院 天津商业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Ada111222333
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以胆固醇为唯一的碳源和能源从不同环境的土壤,肉食动物粪便,发酵食品,灭菌不彻底的培养基中筛选到降解胆固醇的17株细菌和82株霉菌.进一步研究了17株降胆固醇细菌对不同碳源和不同氮源的利用情况、抗生素抗性、染料耐受性和抗盐性、不同pH值和不同温度条件下培养的生长状况,根据129项生理生化指标进行了聚类分析,发现菌株之间差异比较大,相似系数最高的为0.718,最低的为0.149.根据《伯杰细菌鉴定手册》(第八版),从个体形态、群体培养特征、生理生化反应等方面进行常规鉴定,菌株F-1为棒杆菌属——植物致病性棒杆菌.根据16S rDNA序列分析,E-4和J-67为目前为未知的新菌种.对其中8株霉菌从形态,结构和生长繁殖状态确定了分类地位,认为A-13为卵形孢霉属,E-11为束丝菌属,E-115为粘多头束梗属,H-61为枝链孢霉属,M-62为地霉属,M-125为黄青霉,0-12为黄-米曲霉,0-24为暗梗穗孢霉族.胆固醇降解酶的分离纯化路线为:菌株F-1发酵粗酶液经50%,70%硫酸铵分级沉淀,通过Sephadex-G 75凝胶过滤层析纯化,纯化样品经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现单一条带,因而初步认为获得了纯酶.纯化过程中,总的酶活收率为21.8%,共纯化了8.92倍.该研究将为胆固醇降解机理的研究、降胆固醇食品的制备,转基因工程菌株的选育,胆固醇转化产物的制备等奠定研究基础.
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