【摘 要】
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线粒体功能不全是肿瘤细胞最重要的特征之一;mtDNA突变见于多种肿瘤。我们试图通过比较肺癌转移模型细胞株之线粒体差异,探讨线粒体异常对肺癌细胞恶性表型的影响。 采用
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线粒体功能不全是肿瘤细胞最重要的特征之一;mtDNA突变见于多种肿瘤。我们试图通过比较肺癌转移模型细胞株之线粒体差异,探讨线粒体异常对肺癌细胞恶性表型的影响。 采用溴化乙锭处理法获得rho~-细胞;Rh123染色、激光扫描共聚焦显微镜检测线粒体荧光强度;软琼脂集落形成实验检测细胞集落形成能力;Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;MTT方法测定细胞生长状态;mtDNA D-loop区序列分析采用PCR扩增结合PCR产物直接测序。结果显示:rho~-细胞具有更强的集落形成和浸润能力,以及更明显的生长优势。人肺癌高转移PLA801D细胞线粒体荧光强度明显强于低转移PLA801C细胞(p<0.01),但rho~-细胞线粒体荧光强度与其母本细胞没有显著差异。DNA序列分析发现:PLA801C与PLA801D细胞mtDNA D-loop区多个位点发生点突变,以A→G,G→A为主,其次为T→C和C→T等。另外,np316有单碱基G插入。两者不同之处在于:PLA801C mtDNA D-loop区存在A46G和T16285C置换,np216单碱基C插入,而PLA801D仅在np271有单碱基C插入。rho~-细胞mtDNA D-loop区序列分析显示,除具有其母本细胞的基本特征外,两者皆发生了多部位的小片段碱基缺失。 采用比较蛋白质组学技术分析肺癌转移模型细胞线粒体蛋白质表达的差异。首先分离纯化肿瘤细胞线粒体蛋白质,进行2-D电泳;进一步对2-D胶上蛋白电泳斑点做胶内酶切,采用质谱技术检测蛋白肽指纹谱及多肽N-末端测序,实验所得数据做蛋白质数据库检索。结果:肺癌高低转移模型细胞线粒体蛋白质谱有显著不同;Annexin A2和Cyclophilin A在低转移细胞株表达显著高于高转
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