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第一部分miR-141在膀胱尿路上皮癌组织及膀胱癌细胞株中的表达目的研究膀胱尿路上皮癌组织及相关细胞株miR-141及EMT相关蛋白的表达情况。方法采用实时荧光定量PCR检测20例膀胱尿路上皮癌及不同膀胱尿路上皮癌细胞株miR-141的表达水平,分析其与膀胱尿路上皮癌临床参数的关系；采用Werstern-blot技术检测膀胱尿路上皮癌组织、淋巴结转移灶及相关细胞株EMT相关蛋白的表达情况,评估其EMT状态,并分析不同EMT状态组织及细胞株miR-141的表达情况。结果同正常尿路上皮粘膜及癌旁组织相比,miR-141在尿路上皮癌组织中的表达显著上调；同表浅性膀胱癌相比,miR-141在肌层浸润性膀胱癌中的表达则显著下调；同EMT程度较轻肿的瘤原发灶相比,miR-141在EMT程度较强的淋巴结转移灶中的表达显著下调；相对于EMT程度较轻的HTB9及T24细胞株,miR-141在EMT程度较强的UMUC3细胞株中表达水平显著下调。结论随肿瘤分期及分级的提高,miR-141表达水平逐渐降低；无论是膀胱尿路上皮癌组织还是细胞株,随EMT程度的增加,miR-141的表达水平均逐渐降低；在尿路上皮癌进展过程中,miR-141及EMT相关蛋白可能都具有重要作用。第二部分pri-mir-141慢病毒载体的构建及稳定转染膀胱癌UMUC3细胞株目的构建miR-141过表达膀胱癌细胞株,为进一步的体外细胞研究提供基础。方法将根据miRBase数据库数据合成的pri-mir-141序列克隆至pLVX-IRES-ZsGreen1构建pYr-LVX-pri-mir141表达质粒,并行质粒酶切鉴定及测序；将构建的miR-141过表达质粒pYr-LVX-pri-mir141及空白对照质粒pLVX-IRES-ZsGreen1分别进行慢病毒包装并测定慢病毒滴度；不同的慢病毒颗粒侵染靶细胞UMUC3,构建miR-141过表达细胞株UMUC3-141及空白对照细胞株UMUC3-neg,检测UMUC3. UMUC3-neg及UMUC3-141中miR-141的表达水平。结果酶切鉴定及测序结果显示pYr-LVX-pri-mir141表达质粒构建成功；荧光检测及滴度测定显示293T细胞慢病毒包装成功；实时荧光定量PCR检测结果显示,同UMUC3及UMUC3-neg细胞相比,UMUC3-141细胞株miR-141表达水平显著提高。结论酶切鉴定及碱基测序比对结果表明miR-141过表达载体pYr-LVX-pri-mir141构建成功；膀胱癌miR-141过表达细胞株UMUC3-141及对照细胞株UMUC3-neg建立。第三部分过表达miR-141对膀胱癌UMUC3(?)田胞株生物学行为的影响目的检测过表达miR-141对膀胱癌UMUC3细胞株生物学行为的影响。方法分别采用细胞划痕修复实验、transwell侵袭小室实验、MTT检测、平板克隆形成实验及流式细胞凋亡检测技术检测膀胱癌UMUC3、UMUC3-neg及UMUC3-141细胞的转移、侵袭、增殖、克隆形成及抗凋亡能力。结果细胞划痕修复实验显示：48小时后,UMUC3、141细胞的划痕迁移率较UMUC3及MUC3-neg细胞显著降低；Transwell小室实验显示：36小时后,UMUC3-141细胞的细胞穿透数较UMUC3及UMUC3-neg细胞显著减少；MTT检测显示：UMUC3-141细胞增殖能力较另外两组明显降低；克隆平板克隆形成实验显示：三周后UMUC3-141细胞的克隆形成数较UMUC3及MUC3-neg细胞显著减少；凋亡检测显示三组细胞凋亡率无明显差异。结论miR-141过表达可以降低膀胱癌UMUC3细胞株的侵袭、转移及增殖能力,但对其抗凋亡能力无明显影响。第四部分miR-141与膀胱尿路上皮癌EMT、Wnt信号通路关系的初步探讨目的探讨过表达miR-141对膀胱癌细胞株生物学行为影响的内在机制方法生物信息学技术预测miR-141可能的靶基因；Western-blot检测不同miR-141表达水平下各预测靶基因的变化,将存在蛋白变化的靶基因作为最终靶基因；实时荧光定量PCR检测最终靶基因mRNA表达水平；检测不同miR-141细胞组EMT相关蛋白及Wnt信号通路相关蛋白的变化。结果最终筛选出ZEB2和E3F2蛋白编码基因为miR-141靶基因；Western-blot检测显示,miR-141表达水平上调后,ZEB2及E3F2蛋白表达下调；EMT标志蛋白E-cadherin表达上调；Wnt信号通路下游蛋白CyclinD1及MMP-7表达下调。结论过表达miR-141对膀胱癌细胞株UMUC3生物学行为的影响可能与其靶向调控ZEB2及E2F3有关；过表达miR-141介导的E-cadherin的表达上调不仅通过逆转EMT直接降低了肿瘤的侵袭和转移能力；而且导致了WNT/β-catenin信号通路的抑制,即CylinD1及MMP-7蛋白的表达降低,从而间接降低肿瘤的增殖能力及转移侵袭能力。