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黑土、潮土和红壤是我国东部季风区广泛分布的三种农田土壤,弄清三种土壤在不同水热条件下的微生物群落结构特征,特别是影响氮素代谢的氨氧化细菌群落结构的特征,可以为我们在全球气候变化的背景下,提出适应性的施肥措施并口土壤培肥技术。本文通过非培养的方法直接从土壤中提取总DNA,用细菌通用引物扩增16S rDNAV3区,通过DGGE技术分析土壤样品中的微生物群落结构;用氨氧化细菌amoA基因特异引物扩增总DNA,构建amoA基因文库,通过RFLP技术分析土壤样品中的氨氧化细菌群落结构特征。
基于三种土壤在三个气候带(寒温带黑龙江海伦-暖温带河南封丘-中亚热带江西鹰潭)的互置试验,对施肥条件下三种土壤的DGGE图谱分析表明,三种土壤的微生物种类均比较丰富,不同气候条件下相同土壤微生物在DGGE条带数量、位置和条带亮度上相似程度较高,其中红壤样品的条带数量要明显高于潮土和黑土。通过Quantity One软件包定量分析表明,潮土和黑土的微生物种类大致相当,而红壤的种类要明显的高于二者;由寒温带到中亚热带,黑土和红壤微生物种类随着水热的增加而增多,但潮土在暖温带(封丘)微生物种类最高。聚类分析发现,总体上,不同气候条件下相同土壤类型的样品聚在一类;同时,黑土和红壤微生物群落结构的相似程度高,但与潮土相似性低。通过切胶回收条带的测序的结果发现,放线菌是土壤微生物的优势类群。
通过构建9个amoA基因文库,获得30个OTUs,不同土壤amoA文库的优势OTUs存在着差异,其中红壤的OTUs种类最多。库容值变化范围是79.6%~98.0%。多样性指数分析表明,红壤AOB的多样性指数最高,其次是黑土,潮土最低;在pH5.2-8.6之间,AOB群落多样性指数的香农指数和丰富度指数均与pH呈线性显著负相关;黑土和潮土中AOB群落多样性由北向南随着水热的增加而增高,但是这种变化较小。不同土壤9个文库的相似性为41.7%~90.0%,其中暖温带(封丘)黑土(FQ-A)与潮土(FQ-B)的相似程度最高,达到了90.0%,中亚热带条件下(鹰潭)的红壤(YT-C)与暖温带(封丘)潮土(FQ-B)的相似程度最低,只有41.7%。通过构建amoA基因的系统发育进化树,发现所有的AOB种群集中分布在硝化螺菌(Nitrosospira)和亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas),其中Nitrosospira属占绝大多数;Nitrosomonas属主要存在于潮土中,此外寒温带(海伦)的黑土中也有Nitrosomonas属。在测定的25个OTUs类型,被归为9个Cluster,Cluster3a和Cluster10是主要的类群,中亚热带条件下(鹰潭)的红壤(YT-C)中Cluster10占优势,其它土壤都是Cluster3a占优势。Cluster3a适宜于生活在半湿润的暖温带(封丘)土壤中,这一类群对温度较敏感。