第一部分TNF-α和IL-10对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇含量的影响背景过多的胆固醇和胆固醇酯在巨噬细胞内聚积并形成泡沫细胞是动脉粥样硬化的一个典型病理特征。目的以THP-1(人急性单核细胞性白血病细胞)巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响。方法THP-1单核细胞给予160nmol/l佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)孵育72 h,诱导分化成巨噬细胞后在50mg/l氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)中培育48 h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞后随机分为4组:对照组,培养液中不加任何其他物质;TNF-α组,培养液中加10μg/l TNF-α;IL-10组,培养液中加10μg/l IL-10;IL-10+TNF-α组,培养液中加10μg/l IL-10预先孵育2h后,再加10μg/l TNF-α。4组细胞分别培育0 h、6 h、12 h、24 h、48 h后给予10mg/L载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein,apoA-Ⅰ)培育12 h。运用油红O染色分别在光镜和透光电镜下鉴定泡沫细胞形态及变化。采用酶法,通过HITACHI650-60型荧光分光光度计,以325nm为激发波长,415nm为荧光发射波长,检测泡沫细胞内胆固醇含量。结果同0h比较,TNF-α组THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量在12 h、24 h、48 h有明显增加(p<0.05)。IL-10组泡沫细胞内胆固醇含量在各时间点均无明显变化(p>0.05)。IL-10+TNF-α组THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量在24 h和48 h也有增加,但增加的程度较TNF-α组有明显减少(p<0.05)。结论TNF-α明显增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量,加重细胞泡沫化的程度。IL-10部分抑制TNF-α引起的细胞内胆固醇含量的增加,减轻细胞泡沫化的程度。第二部分TNF-α和IL-10对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ATP结合盒转运体A1表达的调控背景ATP结合盒转运体A1(ABCA1)是促进巨噬泡沫细胞内胆固醇流出的一种重要蛋白。目的以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)对ABCA1表达的调控作用及其ABCA1表达与细胞内胆固醇含量的相关性。方法THP-1单核细胞给予160nmol/l PMA孵育72h,诱导分化成巨噬细胞后在50mg/l ox-LDL培养48h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞后随机分为4组:对照组,培养液中不加任何其他物质;TNF-α组,培养液中加10μg/l TNF-α;IL-10组,培养液中加10μg/l IL-10;IL-10+TNF-α组,培养液中加10μg/l IL-10预先孵育2h后,再加10μg/l TNF-α。4组细胞分别培育0 h、6 h、12 h、24 h、48 h后给予10mg/L载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein,apoA-Ⅰ)培育12 h。运用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Western印记分别检测THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA表达和ABCA1蛋白水平。结果同0 h比较,TNF-α组THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA和蛋白水平在12 h、24 h、48 h有明显降低(p<0.05)。IL-10组ABCA1mRNA和蛋白水平在各个时间点均无明显变化。IL-10+TNF-α组ABCA1mRNA和蛋白水平也呈时间依赖性降低,但同TNF-α组相比,其在12 h、24 h和48 h下降程度有明显减轻(p<0.05)。THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA与细胞内胆固醇含量呈明显负相关(r =-0.984, p<0.05)。THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白水平与泡沫细胞内胆固醇含量也呈明显负相关(r =-0.986, p<0.05)。结论THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的变化与细胞内胆固醇含量呈明显负相关。TNF-α下调THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达,增加细胞内胆固醇含量,促进动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发生发展。IL-10部分抑制TNF-α引起的THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达的下调和胆固醇含量的增加,减缓AS的发生发展。