家蚕杆状病毒IAP蛋白功能的研究

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在昆虫杆状病毒基因组中普遍存在一类凋亡抑制基因iap(inhibitor of apotosis),最初是在筛选p35同源基因时发现的。但随着对该基因研究的深入,发现杆状病毒iap基因并不是都具有细胞凋亡抑制功能,它可能还具有其他多种生物学功能。目前在家蚕杆状病毒(Bm NPV)中发现了两种IAP蛋白:IAP1和IAP2,但是其具体功能还未可知。因此,本研究以家蚕杆状病毒(Bm NPV)的IAP蛋白为研究对象,通过构建iap1、iap2缺失型和补回型病毒,研究其可能的生物学功能。研究发现IAP1蛋白并不具有抑制Bm NPV感染诱导的细胞凋亡作用,q-PCR分析结果表明,其对病毒DNA的复制及病毒早期基因lef-3、晚期基因vp39和极晚期基因p10的转录也没有显著影响(P>0.05)。相反,iap2基因具有明显的抑制细胞凋亡的作用(P<0.05),同时iap2基因的缺失也将导致不能产生具有感染活性的病毒粒子。此外,为了进一步研究iap2基因的转录调控机制,我们提取了Bm NPV感染第5天的家蚕五龄幼虫脂肪体组织中的总RNA,利用RT-PCR技术建立了家蚕五龄幼虫脂肪体组织的基因表达文库,并用iap2基因上游启动子区域113bp的DNA序列作为诱饵序列,利用酵母单杂交系统筛选该基因启动子的结合蛋白,共筛选出了5个能与iap2基因启动子序列相结合的蛋白因子,分别是LEF5、P6.9、BRO-D、ORF1629和ODV-E25。综上所述,本研究结果表明Bm NPV中IAP1蛋白对病毒的复制及病毒基因的表达均没有明显的调控作用,也不具有细胞凋亡抑制活性;但IAP2蛋白具有明显的细胞凋亡抑制功能,同时它也是形成感染性病毒粒子的必需基因。此外,我们对具有凋亡抑制功能的iap2基因的转录调控机制也进行了初步探索。本研究工作将为今后深入研究Bm NPV IAP2蛋白的凋亡抑制机制奠定基础,并为杆状病毒表达载体的改造提供理论依据。
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