【摘 要】
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目的:明确miR-30d对人尤文肉瘤SK-ES-1细胞株生物学行为的影响及相关作用机制。方法:CCK-8实验检测miR-30d对人尤文肉瘤SK-ES-1细胞株增殖的影响;Transwell实验检测miR-30d对
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目的:明确miR-30d对人尤文肉瘤SK-ES-1细胞株生物学行为的影响及相关作用机制。方法:CCK-8实验检测miR-30d对人尤文肉瘤SK-ES-1细胞株增殖的影响;Transwell实验检测miR-30d对尤文肉瘤SK-ES-1细胞的侵袭能力的影响;使用划痕实验检测miR-30d对尤文肉瘤细胞SK-ES-1迁徙能力的影响;使用Hoechst33258染色在荧光显微镜下观察mi R-30d过表达时人尤文肉瘤SK-ES-1细胞形态的变化;流式细胞技术检测miR-30d对人尤文肉瘤SK-ES-1细胞株凋亡的影响;Western blot检测miR-30d过表达时人尤文肉瘤SK-ES-1细胞中侵袭、迁徙相关蛋白MMP-2和MMP-9以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和PARP的表达情况。结果:CCK-8实验结果显示,miR-30d过表达可显著抑制人尤文肉瘤细胞株SK-ES-1的增殖;Transwell实验结果显示miR-30d过表达可显著抑制尤文肉瘤SK-ES-1细胞的侵袭能力;划痕实验检测发现miR-30d显著抑制尤文肉瘤SK-ES-1细胞的迁徙能力;Hoechst 33258染色于荧光倒置显微镜下观察发现miR-30d过表达组(miR-30d模拟物组)中人尤文肉瘤SK-ES-1细胞内出现了典型的细胞凋亡形态变化,包括染色质浓缩、核膜裂解、细胞核裂解等;流式细胞术实验结果发现mi R-30d可提高人尤文肉瘤SK-ES-1细胞的凋亡率;Western blot实验发现miR-30d过表达使恶性表型相关蛋白MMP-2和MMP-9表达量降低;Western blot实验结果显示miR-30d过表达使人尤文肉瘤SK-ES-1细胞内促凋亡蛋白Bax的表达量提高,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量降低,因此Bax与Bcl-2的表达量(Bax/Bcl-2)比值升高,细胞凋亡过程中的重要执行蛋白caspase-3以及细胞凋亡底物PARP表达量降低,提示caspase-3出现显著的剪切活化,而PARP被剪切降解。结论:1.miR-30d可诱导人尤文肉瘤细胞株SK-ES-1凋亡并抑制细胞增殖。2.miR-30d可抑制人尤文肉瘤SK-ES-1细胞的侵袭和迁徙能力。
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