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目的
通过研究松果体摘除和补充褪黑素,以及体外褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细胞表达IL-7的影响,探索松果体褪黑素影响胸腺细胞分化发育的机制,进一步揭示松果体褪黑素与胸腺的关系,从而丰富人类对神经-内分泌-免疫网络的认识。
方法
①消化法原代培养大鼠胸腺基质细胞,差数贴壁和差别消化法纯化出胸腺上皮细胞,应用广谱角蛋白抗体做免疫细胞化学染色进行鉴定;
②运用MTT法观察褪黑素干预对体外培养胸腺上皮细胞生长的影响,半定量RT-PCR法观察胸腺上皮细胞经褪黑素干预后IL-7mRNA表达的变化;
③建立松果体摘除动物模型:选用2月龄雄性清洁级SD大鼠110只,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素腹腔注射7.5mg·kg-1·day-1组和松果体摘除+褪黑素腹腔注射15mg.kg-1·day-1组,松果体摘除组动物腹腔注射等量生理盐水,术后4、8周取材。
④运用免疫组织化学法和半定量RT-PCR法观察松果体摘除及补充褪黑素后,大鼠胸腺上皮细胞IL-7表达的变化。
结果
①体外培养和纯化的胸腺基质细胞经鉴定证明90%以上为胸腺上皮细胞;
②褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细胞的生长没有显著影响,但能使IL-7mRNA的表达水平明显升高,且呈剂量依赖性;
③松果体摘除后大鼠胸腺IL-7免疫组化和RT-PCR的结果与假手术对照组相比无显著差别;
④与对照组相比,松果体摘除大鼠补充高剂量褪黑素4W后,免疫组化结果显示胸腺IL-7阳性面积增加、平均灰度下降,RT-PCR结果显示mRNA水平显著增高,但8W后均下降至正常水平。
结论
培养大鼠胸腺上皮细胞经褪黑素干预后IL-7的表达水平呈剂量依赖性升高。松果体摘除对大鼠胸腺IL一7的表达没有影响,但补充大剂量外源性褪黑素后在一定时间内能使IL一7的表达显著增高,长时间作用则其作用逐渐消失。