水稻条纹病毒侵染拟南芥的研究

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水稻条纹病毒(rice strip virus, RSV),纤细病毒属(Tenuivirus)的代表种,主要由介体昆虫灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallen)以持久方式经卵传毒,侵染水稻造成水稻条纹叶枯病,近年来在我国广大稻区大面积爆发流行。尽管近几十年来,科研人员对RSV的生物学和分子生物学等方面进行了广泛的研究,已经鉴定了多个RSV编码蛋白功能,但RSV致病相关基因的功能鉴定还有待进一步研究。本文通过简单的带毒灰飞虱接种,使RSV成功侵染模式植物拟南芥,并造成植株严重的病害症状。RSV接种拟南芥植株2周后,植物叶片开始显现病害症状:新生叶片叶脉黄化变色;1个月后,所有接种RSV拟南芥植株生长缓慢,新生叶片叶脉黄化变色;45d之后,RSV侵染拟南芥植株严重矮化,地上部分生物量显著少于健康植株,开花茎扭曲,高度只有健康植株的一半左右。斑点免疫结合印迹、RT-PCR和蛋白免疫印迹结果表明,RSV能在拟南芥植株体内复制。这些结果表明,RSV能成功侵染拟南芥,造成植株严重的病害症状,并能在拟南芥植株体内复制。本文通过RSV接种转基因拟南芥和拟南芥突变体,对拟南芥抗RSV的途径进行了初步的研究。RSV可以成功侵染不积累水杨酸(salicylic acid, SA)的转基因拟南芥NahG植株,水杨酸信号转导缺失突变体nprl-1拟南芥植株,以及Dicer-like protein缺失突变体dcl2-1、dcl3-1、dcl4-2e、dcl2-1/dcl3-1、dcl2-1/dcl3-1/dcl4-2e拟南芥植株,并造成植株严重的病害症状。RSV侵染NahG与野生型植株25d, NahG植株显著小于野生型;35d,感病NahG植株叶片停止生长,大小几乎和10d前一样,而感病野生型植株叶片继续生长;45d,感病NahG植株地上部分生物量显著少于野生型植株。RSV侵染npr1-1和野生型植株45d,植株地上部分的生长量基本一致。RSV侵染dcl2-1、dcl3-1、dcl4-2e、dcl2-1/dcl3-1、dcl2-1/dcl3-1/dcl4-2e和野生型植株45d, dcl3-1单突变体、dcl2-1/dcl3-1双突变体和dcl2-1/dcl3-1/dcl4-2e三突变体植株地上部分生物量显著大于野生型,dcl2-1单突变体、dcl4-2e单突变体植株地上部分生物量与野生型植株地上部分生物量基本一致。这些结果表明,与野生型拟南芥相比,NahG植株对RSV更感病,而dcl3-1单突变体、dcl2-1/dcl3-1双突变体和dcl2-1/dcl3-1/dcl4-2e三突变体植株对RSV更抗病。
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