【摘 要】
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与大肠杆菌(Eccherichia colli,E.coli)相比,氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans,G.oxydans)中的磷酸烯醇丙酮酸:糖磷酸转移酶系统(PTS),含有共同的组分EⅠ、HPr和EⅡA,
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与大肠杆菌(Eccherichia colli,E.coli)相比,氧化葡萄糖酸杆菌(Gluconobacter oxydans,G.oxydans)中的磷酸烯醇丙酮酸:糖磷酸转移酶系统(PTS),含有共同的组分EⅠ、HPr和EⅡA,但缺失了 EⅡ蛋白中的EⅡB和EⅡC两个功能组分。为了探究G.oxydans中各组分的功能,我们希望能够通过增强或抑制PTS系统各组分的基因表达来探究它们各自的生理功能。近年来,已经有大量文献报道,非编码sRNA(small non-coding RNA)在E.coli中有效地抑制和激活靶基因的表达。因此,在本课题中,我们尝试在G.oxydans中设计特异性sRNA对G.oxydans内源性基因进行调控。首先,我们以绿色荧光蛋白基因(gfp)为报道基因,成功构建了 3种能够有效抑制或激活GFP表达的调控系统。基于该调控系统,我们又选取了 G.oxydans DSM2003中的PTS的组分EI蛋白作为目标蛋白,设计了一系列特异性sRNA,并通过Dot blot实验检测各菌株中sRNA对EI蛋白表达的抑制效果,最终成功筛选到2个能够有效抑制EI表达的sRNA。本课题首次在G.oxydan 中实现了 sRNA的调控。
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