骨髓增生异常综合征患者线粒体Mitoferrin-1/-2、ABCB10的表达与其铁超载的关系

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研究目的通过对骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndromes,MDS)患者Mitoferrin-1、Mitoferrin-2和ABCB10在基因水平和蛋白水平的表达研究,揭示MDS患者线粒体铁超载的原因,探讨线粒体铁代谢异常在MDS发病中的作用,为祛铁治疗MDS提供依据。研究对象和方法1.选择MDS初诊患者(成人23例和儿童8例)为实验组,免疫性血小板减少症(ITP)初诊患者(成人12例和儿童8例)为本实验的近似健康对照组。实验组入选标准参照WHO(2008)MDS诊断分型,且要求未行输注红细胞和祛铁治疗;实验组和对照组均排除其它血液系统疾病、严重感染、甲状腺功能亢进等铁代谢异常的疾病。2.用无菌注射器分别抽取实验组和对照组的骨髓液,迅速涂片数张,后再抽取骨髓液各2-4ml,并迅速打入EDTA抗凝管中。3.分别抽取实验组和对照组清晨空腹静脉血各3ml,肝素抗凝,送至我院生化室检测血清铁代谢指标。4.分别对实验组和对照组骨髓细胞涂片行铁染色,光学显微镜下观察骨髓细胞外铁、内铁的分布,记录并采集图像保存。5.应用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,并分装2管分别用于总RNA和蛋白的提取,于-80℃保存。6.参照Trizol试剂说明书提取骨髓单个核细胞中总RNA,检测RNA的纯度及完整性;应用Fermentas第一链反转录试剂盒合成cDNA;采用Real-time PCR测定Mitoferrin-1mRNA. Mitoferrin-2mRNA和ABCB10mRNA的表达。7.使用RIPA裂解液提取骨髓单个核细胞中总蛋白,应用Western Blot分别测定Mitoferrin-1. Mitoferrin-2和ABCB10蛋白的表达。结果1.成人MDS患者Mitoferrin-1mRNA、Mitoferrin-2mRNA和ABCB10mRNA的表达与对照组比较均无明显统计学差异(P>0.05)。2.(1)成人低危组即MDS-RA、MDS-RARS患者Mitoferrin-1蛋白的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);(2)高危组RAEB患者Mitoferrin-1蛋白的表达与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);(3)RARS患者Mitoferrin-1蛋白的表达高于RA,差异有统计学意义(P<0.001)(4)MDS患者Mitoferrin-2蛋白的表达与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);(5)低危组ABCB10蛋白的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);(6)高危组ABCB10蛋白的表达与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);(7)RARS患者ABCB10蛋白的表达高于RA,差异有统计学意义(P<0.001)。3.MDS患儿Mitoferrin-1mRNA. Mitoferrin-2mRNA和ABCB10mRNA的表达与对照组比较均无明显统计学差异(P>0.05)。4.(1)2例RA患儿Mitoferrin-1蛋白的表达均高于对照组;(2)RAEB患儿Mitoferrin-1蛋白的表达与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);(3)MDS患儿Mitoferrin-2蛋白的表达与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);(4)2例RA患儿ABCB10蛋白的表达均高于对照组;(5)RAEB患儿ABCB10蛋白的表达与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.MDS患者Mitoferrin-1和ABCB10在基因水平上的表达较对照均无明显增高,但在蛋白水平上的表达呈现出异质性,低危组(RA、RARS)表达高于对照组,高危组(RAEB)与对照组相比无明显增高。2.MDS患者Mitoferrin-2在基因和蛋白水平上的表达较对照均无明显增高。3.MDS患者Mitoferrin-1的表达可能受转录后的调节,在ABCB10介导下不适当的稳定性的增加可能参与了部分MDS(尤其是RARS)患者线粒体铁超载的发生。4. Mitoferrin-2可能与MDS线粒体铁超载的发生无关。
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