不动杆菌基因分型及其对碳青霉烯类抗生素耐药的分子机制研究

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本文探索简便有效的不动杆菌鉴定方法、研究临床分离的碳青霉烯类抗生素耐药的不动杆菌耐药机制、研究相关碳青霉烯酶的定位、产生和传播机制,将为不动杆菌的临床监测、预防和治疗提供指导和理论依据。为此,我们收集了和体外筛选了碳青霉烯类抗生素耐药的不动杆菌进行了研究。   本文采用兼并或特异引物对碳青霉烯耐药的鲍曼不动杆菌的B类(IMP和VIM)和D类(OXA-23,-27和OXA-24,-25,-26,-40)碳青霉烯酶进行检测。同时,对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶及其3’-5’-保守区域(包含耐药基因盒结构)进行扩增。对扩增子测序并于GenBank数据库中搜索比对,确定其基因型。等电聚焦及抑制试验用于研究这些细菌的所产β-内酰胺酶的特点。质粒接合传递试验用于研究这些碳青霉烯类抗生素的耐药性是否具有可传递特性。   本文采用亚胺培南体外连续筛选方法对12株ISAB进行筛选试验。采用特异引物对所有细菌的blaOXA-23基因进行检测。Qiagen质粒提取试剂盒提取质粒,CTAB法提取细菌基因组DNA并用EcolR对其进行限制性酶切。对细菌整合子进行体外扩增。对质粒、整合子及基因组DNA与blaOXA-23基因探针杂交,确定其基因定位。   本文报道了耐亚胺培南的琼氏不动杆菌可携带blaOXA-23基因,且为染色体定位;发现细菌外膜蛋白的改变可能是其另一耐药分子机制。
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