【摘 要】
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MicroRNA(miRNA)是一种内源性非编码RNA,因其在体内的调节异常会直接造成癌症等疾病的发生,所以miRNA检测对某些疾病的预判、诊断和治疗具有重要意义。以荧光量子点作为发色
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MicroRNA(miRNA)是一种内源性非编码RNA,因其在体内的调节异常会直接造成癌症等疾病的发生,所以miRNA检测对某些疾病的预判、诊断和治疗具有重要意义。以荧光量子点作为发色基团的荧光共振能量转移技术在核酸检测上有着独特的优势,它不仅可以作为纳米尺衡量短链核酸的长度,而且其荧光强度的改变可以作为检测核酸的定量依据。以微流控液滴作为分析检测的载体,不仅具有多通道同时检测的优势,并且生成的液滴具有尺寸可控、速度可调、体系封闭等特点,有利于提高检测重现性和灵敏度。本文中,我们基于微流控液滴芯片搭建了一个多色荧光检测系统,通过荧光发射波长不同的四种量子点进行同时检测,对系统的检测性能进行了优化;并基于荧光共振能量转移技术,实现了对两种短链DNA的同时检测,以及两种与结肠癌发生相关的miRNA的同时检测。第一章,首先介绍了 miRNA的检测意义和常用检测方法;其次,概述了荧光共振能量转移技术在miRNA及其它核酸检测中的应用;然后介绍了微流控液滴在核酸检测上的应用;最后,提出了本论文的工作目的和设计思想。第二章,基于激光诱导荧光检测原理,搭建了一个微流控液滴多色荧光检测系统。通过优化芯片构型、光路设计等实现了对四种荧光量子点同时检测,检出限达1.8×10-9-1.2×10-10mol/L。第三章,基于荧光共振能量转移原理构建了荧光淬灭体系,以短链DNA或miRNA作为桥梁,使发生荧光共振能量转移的量子点和淬灭剂之间距离拉近,从而发生荧光淬灭作用。采用上述搭建的微流控液滴多色荧光检测系统实现对DNA和miRNA的定量检测,当miRNA的浓度范围在2×10-6-9×10-6mol/L时,淬灭效率与浓度间关系曲线成二次拟合函数。第四章,对本文搭建的微流控液滴多色荧光检测系统同时检测多种核酸进行了总结,并展望它在生物分析方面的应用前景。
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