油茶籽壳多糖、原花青素的综合提取及其分离纯化

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多糖(Polysaccharides),又称多聚糖,是由多个单糖分子缩合而成的一类结构复杂的生物大分子物质。多糖类物质是所有生命有机体的重要组成部分,科学研究证明多糖具有抗肿瘤、免疫、降血糖、抗病毒等多种生物功能,且对机体几乎无毒副作用。它广泛存在于动物、植物和微生物细胞壁中。原花青素(Proanthocyanidins,简称PC),是一类由不同数量的单体黄烷-3-醇或黄烷-3,4-二醇缩合而成的多酚类化合物,具有抗氧化、抗肿瘤、降低胆固醇等多种药理活性,是一种高效、低毒、高生物利用度的天然物质。广泛分布于自然界中。油茶籽壳为油茶树(Camellia oleifera Abel)种籽的外种皮,质地比较坚硬,主要成分为纤维素和多缩戊糖等,目前油茶籽壳的利用研究仅集中在糠醛、活性炭与木糖醇的制备上;因此,本文从油茶籽壳中综合提取多糖和原花青素,并对其进行分离纯化研究,旨在利用油茶籽壳进行多糖和原花青素的开发,扩大天然活性物质的提取资源,为油茶籽壳的进一步研究和综合利用提供理论依据,促进油茶生产的发展。以油茶籽壳为材料,采用超声波进行多糖和原花青素的综合提取研究,以超声功率、料液比、乙醇浓度、浸提温度、超声时间为影响因子,进行单因素提取研究;为了更好的进行综合提取,在单因素实验的基础上,采用正交试验研究了超声功率(A)、料液比(B)、乙醇浓度(C)、浸提温度(D)和超声时间(E)对多糖和原花青素提取率的影响,方差分析表明,对综合提取影响较为显著的是乙醇浓度(C),其次是超声功率(A),料液比(B)、浸提温度(D)和超声时间(E)对综合提取影响较小,并确定了超声波综合提取最佳工艺条件为:超声功率300W,料液比1:70(g/mL),60%乙醇,浸提温度60℃,超声时间30min,在此条件下,多糖和原花青素提取率达到0.204%、2.10%。最佳工艺条件下实验的可重复性较好,结果稳定可靠。采用大孔吸附树脂和活性碳对油茶籽壳粗多糖进行静态脱色研究,筛选出HPD-200A、HPD-400A、HPD-700型大孔树脂,其对多糖的脱色率和保留率相对较高;为优化脱色条件,通过正交试验研究了树脂种类(A)、脱色时间(B)、脱色温度(C)对脱色率和多糖保留率的影响,结果表明,采用HPD-700,30min,30℃条件下,多糖脱色率为20.92%,多糖保留率为93.36%。对初步分离纯化后的油茶籽壳多糖理化性质进行分析,并利用GC-MS初步鉴定出油茶籽壳多糖中的单糖组成中含有赤藓糖、D-果糖。采用Sephadex LH-20凝胶分离油茶籽壳原花青素,依次采用60%乙醇、60%的丙酮水溶液作为洗脱液洗脱,并对所得到的乙醇洗脱液(冷冻干燥得样品1)和丙酮洗脱液(冷冻干燥得样品2)进行分析鉴定,通过UV扫描、花青素反应和HPLC等检测。结果表明:样品1、2均为原花青素,样品1、2的得率分别为19.5mg/g、12.1mg/g,纯度分别为3.8%、57.3%,判断样品1含有GA,样品2含有ECG等原花青素单体物质。
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