二化螟Chilo suppressalis是亚洲地区最重要的水稻害虫之一,对我国水稻高产、稳产造成严重的影响。近年来二化螟的大面积发生以及对水稻等作物的为害日驱严重,因其具有钻蛀性危害的特点,对其防治一直相对比较困难。因此,开展对二化螟的致病机理研究、新型微生物农药制剂的研究,对有效的防控二化螟具有非常重要的意义。本文通过病原真菌的筛选、病原真菌对二化螟的毒力测定,以及病原真菌的分子鉴定,筛选出了对二化螟具有高毒力的球孢白僵菌,系统评价了白僵菌对二化螟的应用效果,为二化螟的生物防治及白僵菌的应用提供了理论依据。实验获得的主要结果如下:1.病原真菌的分离纯化及生物学特性研究采集田间自然罹病的二化螟僵虫500头,利用组织分离法,从二化螟僵虫虫体上分离出杀虫真菌36株,经真菌培养纯化后,保存备用。从分离纯化的36株杀虫真菌中筛选出10株对害虫有致病力的真菌,测定菌落生长直径、初始产孢时间、产孢量以及孢子萌发率等多项生物指标。结果显示:菌株Bbr14、Bbr84、YQ147和菌株QING在SDAY培养基上培养7d后,其菌落直径均超过1.4cm,最高的达到1.89cm,表现出良好的生长性状。菌株Bbr84、QING、YQ147和Bbr14等4株菌株初始产孢时间分别是2.83d、3.03d、3.22d和3.49d,与其他6株菌株相比时间较短;产孢量分别是3.28×108孢子/cm²、3.12×108孢子/cm²、3.01×108孢子/cm²、2.85×108孢子/cm²,产孢量相对较高;该4株菌株的萌发率相对较高,分别为96.14%、95.24%、92.12%和90.11%,均超过90%。2.病原真菌对二化螟的毒力测定以水稻害虫二化螟为研究对象,利用喷雾法测定所筛选的10株菌株在相同浓度、湿度和温度下对二化螟不同虫态的室内毒力。结果表明:不同菌株对不同虫态二化螟的毒力效果差异显著。真菌YQ147、QING、Bbr14、Bbr84在浓度为1.0×108孢子/m L下均对二化螟具有较强的致病力,其中真菌YQ147在处理后第10d对二化螟3龄幼虫的累计校正死亡率达到78.4%,LT50为5.8d,对二化螟卵块的累计校正死亡率达到99.7%,LT50为3.54d,实验结果明显高于其他菌株。对二化螟的室内毒力测定显示,二化螟的累计校正死亡率越高,LT50越小,菌株的致病效果就越好。3.高毒力菌株入侵机理和分子鉴定通过室内毒力测定,筛选出毒力最强的菌株,通过扫描电镜观察杀虫真菌分生孢子对二化螟的侵染过程,研究其入侵机理;根据该菌株的生物学特性,利用白僵菌Beauveria sp.18S r DNA ITS序列进行PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测和序列分析,并在核酸序列数据库中进行同源性序列对比,以及构建系统树确定其所在分支,最终确定其种类。结果显示该菌为白僵菌属球孢白僵菌Beauveria bassiana。4.响应面法优化高毒力病原菌株的营养条件选择价廉易得的实验材料作为固体发酵培养基,以单因素的实验为基础,利用响应面组合设计实验条件参数,对球孢白僵菌固体发酵培养基配方比例进行优化,以发酵7d的产孢数量为发酵配方的质量标准。优化实验结果表明:固体培养基中米粉、花生壳和稻壳的配比为5.00g:1.00g:0.65g时,测得单位重量培养基中菌株YQ147的产孢量最高,达到4.0723×10¹⁰孢子/g,比单因素实验的最高值3.858×10¹⁰孢子/g高出5.49%,与理论预测值基本相一致。