抗人胰腺癌单克隆抗体研究

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本文报导了利用鼠—鼠杂交技术进行了成功的细胞融合,获得40株分泌抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤。从中我们筛选出六株进行了特异性鉴定和免疫化学方面的分析。并进一步研究了单抗对肿瘤细胞生长,分化的调控。 在特异性方面,我们采用ELISA和RIA两种方法鉴定了这六个单抗与19种细胞的反应性。两种方法的测定结果基本上一致。一般来讲,这六种单抗都或多或少与上皮起源的肿瘤细胞有交叉反应,而不与白血病细胞株和正常人的淋巴细胞、红细胞反应。间接免疫荧光染色冰冻组织切片的结果提示,这六个单抗识别的抗原有着相互不同的胂瘤分布谱。在所检测的正常人组织和胎儿组织中则均为阴性。这六个单抗无一与CEA有交叉反应,但PM4单抗确可与抗CA19-9单抗竟争结合CA19-9抗原。免疫化学分析结果表明:这六个单抗所识别的抗原均是位于细胞膜表面的糖蛋白,其中PM6单抗识别的抗原中的糖基是构成抗原决定簇的关键成份。免疫沉淀方法测得PM8单抗识别的抗原分子量为18.5KD。用免疫印迹法得出PM2单抗识别的抗原为41、43和50KD的三条蛋白带。 在单抗对肿瘤细胞生长、分化调控方面,我们首先探讨了单抗对肿瘤细胞的增殖影响。PM6单抗可明显抑制PANC-1细胞的生长,使其倍增时间延长,饱合密度下降,并使PANC-1细胞在0.3%琼脂内形成集落的能力下降。PM3单抗亦有增殖抑制作用,但不及PM6单抗强。PM3单抗的作用机制有可能是阻止了PANC-1细胞有丝分裂。进而,我们从形态学方面研究了单抗对肿瘤细胞的影响,结果可见,PM6单抗可使PANC-1细胞由多角形向梭形方面转化,细胞突起变得十分明显,形成类树突状细胞。但这种作用是PM6单抗依赖的,当去除PM6单抗后,细胞形态很快恢复原状。此外,我们还从PANC-1细胞与胶原蛋白相互作用方面探讨了单抗对PANE-1细胞分化影响。结果可见PM6,PM9单抗明显降低PANC-1细胞与胶原蛋白的结合,提示经单抗处理的PANC-1细胞的侵袭与转移能力下降。在膜抗原表达方面,这六个单抗识别的膜抗原表达均与细胞周期无关,并且rHu-IFN-α1可使PM6单抗识别的抗原表达增强,但却使PM2和PM8单抗汉别的膜抗原表达下降。这表明肿瘤相关抗原的复杂性。 肿瘤相关抗原功能的研究,现还刚刚开始。通过我们的研究工作可以看出某些肿瘤细胞表面的肿瘤相关抗原在肿瘤细胞发生、发展中不同程度的发挥着某种作用。通过单抗隆抗体为分子探针研究胂瘤相关抗原的功能无疑是一条可行的路线。从而走出以往仅限于特异性研究的旧框框。
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