H2O2参与的细菌间体在细胞分裂中的功能及其分子机制研究

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本实验拟以大肠杆菌及其多个H2O2相关基因的突变体资源为材料,利用可见、紫外分光光度法,透射电子显微镜等技术,研究H2O2对细菌间体功能的介导及其分子机制,探讨细胞分裂中H2O2参与的间体的功能;阐明H2O2额外大量产生及时空定位转换的问题,分析这些额外产生的H2O2的胞内来源。该项目的完成将进一步阐明和完善H2O2的作用机理和生物学功能。对细菌特有细胞器-间体功能完成机制的阐释,将有助于细菌功能学研究的进一步深入。实验结果表明:在常规组织化学方法基础上调整和改进了电镜组织化学染色法,确定了H2O2的染色与样品固定同时进行是定位细菌细胞中内源性H2O2的一种可取方法。观察了大肠杆菌H2O2在细胞分裂周期中的时空定位变化。基因突变和外源加入CAT处理都会影响胞内H2O2的水平,H2O2含量与大肠杆菌的生长繁殖呈负相关。离体后间体中仍有大量H2O2产生和积累,确定间体是额外H2O2的胞外产生来源。加入盐酸羟胺后立即在4℃条件下冰浴处理10min,之后在40℃条件下温浴40min,为间体重新释放H2O2的最佳条件。间体对原生质体再生起到积极作用。结论:在大肠杆菌菌株中发现胞内额外的大量H2O2积累和定位与细胞分裂的进程密切相关,这种H2O2的时空变化很可能是细菌分裂时的普遍现象。且H2O2对细菌增殖中具有重要的作用。
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