血红素氧合酶(HO-1)在PM2.5致人脐静脉内皮细胞损伤中的作用

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目的通过观察活性氧(ROS)清除剂(钛试剂,Trion)和血红素氧合酶-1(HO-1)抑制剂锌原卟啉(ZnPP)对空气细颗粒物(PM2.5)所致人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的生物作用的影响,探讨HO-1在PM2.5致HUVECs损伤中的作用机制。材料与方法复苏冻存的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),正常培养至对数生长期用于实验。实验分组:(1)空白对照组:细胞正常培养24h。(2)PM2.5染毒组:分别在PM2.5浓度为200、400、800μg/ml下培养24h。通过比较细胞活性选择PM2.5染毒浓度为400μg/ml进行后续实验。(3)PM2.5+Trion组:Trion(10μM)干预细胞1h后,加入PM2.5,培养24h。(4) PM2.5+ZnPP组:ZnPP(10μM)干预细胞1h后,加入PM2.5,培养24h。收集干预后的各组细胞,用MTT法比较细胞活性,逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫细胞荧光法分析细胞内HO-1mRNA及蛋白表达,荧光探针标记法测定细胞内活性氧(ROS)水平,流式细胞技术测定细胞凋亡率。结果1.与对照组(设其生存率为100%)相比,PM2.5组细胞活性随着其浓度增加而降低,当PM2.5染毒浓度为200、400、800μg/ml时,细胞存活率依次为(67.02±5.12)%、(54.52±5.74)%、(44.81±7.80)%;当PM2.5染毒浓度为400μg/m1时,PM2.5组、PM2.5+Tiron组、PM2.5+ZnPP组细胞生存率分别为(54.52±5.74)%、(78.46±7.74)%、(40.40±4.58)%(P<0.05)。2.当PM2.5染毒浓度为400μg/ml时,对照组、PM2.5组、PM2.5+Tiron组、PM2.5+ZnPP组的细胞HO-1mRNA光密度比值分别为0.83±0.04、1.24±0.04、0.60±0.21、0.68±0.08(P<0.05)。3.当PM2.5染毒浓度为400μg/ml时,对照组、PM2.5组、PM2.5+Tiron组、PM2.5+ZnPP组的细胞H0-1蛋白平均荧光强度值分别为26.16±4.31、83.10±4.80、60.90±1.14、45.41±1.44(P<0.01)。4.当PM2.。染毒浓度为400μg/ml时,对照组、PM2.5组、PM2.5+Tiron组、PM2.5+ZnPP组的细胞内ROS荧光强度值分别为4.00±0.95、12.88±2.26、9.29±1.06、29.33±0.51(P<0.05)。5.当PM2.。染毒浓度为400μg/ml时,对照组、PM2.5组、PM2.5+Tiron组、PM2.5+ZnPP组的细胞凋亡率分别为(3.12±3.49)%、(13.30±5.22)%、(6.05±1.25)%、(22.13±3.09)%(P<0.05)。结论大气PM2.5可引发人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤,血红素氧合酶参与了抗氧化过程;HO-1活化可能与细胞内ROS表达水平有关,HO-1表达增加可能在HUVECs对PM2.5反应中起重要作用。
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