【摘 要】
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目的:蛋白质组学分析HBV剪接特异性蛋白HBDSP对Huh7肝癌细胞株的影响。方法:构建HBDSP编码基因与FLAG标签融合表达的真核载体,转染Huh7肝癌细胞株,提取总蛋白,以FLAG标签抗体
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目的:蛋白质组学分析HBV剪接特异性蛋白HBDSP对Huh7肝癌细胞株的影响。方法:构建HBDSP编码基因与FLAG标签融合表达的真核载体,转染Huh7肝癌细胞株,提取总蛋白,以FLAG标签抗体检测目的蛋白的表达;借助双向电泳技术进行蛋白质组学分析,筛选差异表达的蛋白;利用实时荧光定量PCR及Western Blotting,分别在转录水平及蛋白水平对差异蛋白进行验证。结果:获得HBDSP真核表达载体pc DNA3.1/Hygro(+)-HBDSP-FLAG,在转染该载体的Huh7肝癌细胞株成功检测到目的蛋白HBDSP的表达;提取HBDSP过表达细胞的总蛋白,经双向电泳分离,共筛选出16个差异蛋白点进行质谱分析,鉴定出14种不同的蛋白质:VCP(含结络蛋白),CCT8(CCT8分子伴侣),CNDP2(胞质非特异性肌肽酶),ZNF619(锌指蛋白619),ACTG1(重组人肌动蛋白-γ1),PDXK(吡哆醛激酶),YWHAB(人14-3-3蛋白),GLO1(乳酰谷胱甘肽裂合酶),TCTP(翻译控制肿瘤蛋白),CNPY2(蛋白质树冠同族体2),MTX2(线粒体外膜复合蛋白质2),TPMT(硫代嘌呤甲基转移酶),DCPS(清道夫m RNA脱帽酶),RAN(GTP结合的核蛋白);选取RAN,PDXK进一步验证,证实RAN与PDXK在转录水平及蛋白水平表达均升高。结论:在肝癌细胞株过表达HBV剪接特异性蛋白HBDSP可引起细胞蛋白表达谱变化,为进一步了解该蛋白对肝细胞功能的影响、探索其致病性打下基础。
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