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目的:本实验通过观察柞蚕雄蛾液对酒精性肝纤维化动物模型的作用,以及转化生长因子β1/Smads、结缔组织生长因子、金属蛋白酶组织抑制因子-1、骨形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂、Toll样受体与细胞间隙连接蛋白43在肝脏中表达变化的情况,探讨柞蚕雄蛾液保护肝脏的作用机制;并且通过对EMT相关指标Twist因子、E-钙黏蛋白与波形蛋白表达情况进行分析,探讨酒精性肝纤维化过程中EMT的发生及柞蚕雄蛾液对酒精性肝纤维化的影响。旨在为临床拮抗酒精性肝纤维化提供较为充分的理论依据。方法:1.将雄性SPF级小鼠C57随机进行分组,组别为:空白对照组、模型组、柞蚕雄蛾液高剂量组和柞蚕雄蛾液低剂量组。后三组制备酒精性肝纤维化模型,每周称重1次,连续干预16周后处死小鼠取肝脏,称重计算肝指数。2.血清学ALT与AST测定。3.苏木素-伊红染色,观察肝组织病理学改变。4.Masson法染色,观察胶原纤维的面积。5.免疫组织化学法检测肝组织中TGF-β1、CTGF、TIMP-1、BAMBI、TLR4、Connexin43、Twist、E-Cadherin与Vimentin的蛋白表达水平。6.Western blot方法检测肝组织中TGF-β1、SMAD2/3、BAMBI、TLR4、Twist、E-Cadherin与Vimentin的蛋白表达水平。结果:1.柞蚕雄蛾液对小鼠一般生长状况的影响模型组小鼠与同期其它各组比较状态差。柞蚕雄蛾液高剂量组小鼠与柞蚕雄蛾液低剂量组小鼠体重在一定时间内有所增加,毛发较整齐光亮,状态尚可。2.肝指数及血清中ALT及AST检测结果模型组较之对照正常组,肝指数增大(P<0.01);柞蚕雄蛾液高剂量组与柞蚕雄蛾液低剂量组较之模型组,肝指数降低(P<0.01)。与对照正常组比较,模型组的ALT与AST升高,柞蚕雄蛾液高剂量组的AST升高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,柞蚕雄蛾液高剂量组与柞蚕雄蛾液低剂量组的ALT与AST降低(P<0.01)。3.肝组织HE染色及Masson染色结果HE染色结果显示,柞蚕雄蛾液高剂量组与柞蚕雄蛾液低剂量组肝细胞出现脂肪变性,并有轻度肿胀现象;同时,呈现点灶状的坏死,可见炎细胞浸润等表现。柞蚕雄蛾液低剂量组坏死程度及范围轻于柞蚕雄蛾液高剂量组,与模型组比较,其坏死程度及坏死范围明显减轻。模型组有纤维化改变。Masson染色结果显示:与对照正常组比较,模型组的胶原纤维面积明显增大(P<0.01);胶原纤维面积在柞蚕雄蛾液高剂量组与柞蚕雄蛾液低剂量组中与模型组比较明显减小(P<0.01,P<0.05)。4.免疫组织化学方法检测结果与对照正常组比较,模型组、柞蚕雄蛾液高剂量组与柞蚕雄蛾液低剂量组TGF-β1、TIMP-1、CTGF、BAMBI、TLR4、Twist与Vimentin蛋白表达量明显增高,Connexin 43蛋白表达量明显降低;模型组与柞蚕雄蛾液高剂量组E-cadherin蛋白表达量明显降低(P<0.01)。与模型组比较,柞蚕雄蛾液高剂量组与柞蚕雄蛾液低剂量组TGF-β1、TIMP-1、CTGF、BAMBI、TLR4、Twist与Vimentin蛋白表达量明显降低,Connexin 43与E-cadherin蛋白表达量明显升高(P<0.01,P<0.05)。5.Western blot法检测蛋白在肝组织中的表达水平与对照正常组比较:TGF-β1、SMAD2/3、TLR4、Twist与Vimentin蛋白相对表达量在模型组与柞蚕雄蛾液高剂量组中增高,E-cadherin降低;柞蚕雄蛾液低剂量组TGF-β1蛋白相对表达量增高;模型组的BAMBI蛋白表达量相对水平增高(P<0.01)。与模型组比较:柞蚕雄蛾液高剂量组与柞蚕雄蛾液低剂量组的TGF-β1、BAMBI与Twist蛋白相对表达量降低;柞蚕雄蛾液低剂量组的Smad2/3、TLR4与Vimentin蛋白相对表达量降低(P<0.01,P<0.05)。结论:1.采用酒精灌胃可以诱导C57小鼠酒精性肝纤维化的发生。2.柞蚕雄蛾液能明显降低酒精灌胃的小鼠血清中ALT与AST水平,减轻肝细胞坏死程度及范围,对酒精性肝损伤具有保护作用,低剂量柞蚕雄蛾液的效果优于高剂量柞蚕雄蛾液。3.酒精性肝纤维化发展过程中呈现上皮-间质转化,上皮-间质转化在酒精诱导的肝纤维化过程中发挥着重要作用。4.柞蚕雄蛾液对上皮-间质转化的现象具有明显的抑制作用,可能与下调Twist与Vimentin表达,上调Connexin 43与E-cadherin表达有关。5.柞蚕雄蛾液对酒精诱导的小鼠肝纤维化具有显著的防治作用,其机制可能与调控TGF-β1/Smad2/3信号转导通路,下调TIMP-1、CTGF、BAMBI及TLR4的表达抑制HSC的活化与增殖,抑制上皮-间质转化有关。