精子特异性乳酸脱氢酶DNA疫苗的粘膜免疫及其效果的动物实验研究

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精子特异性乳酸脱氢酶通常由四个C亚基组成,因此又称为乳酸脱氢酶C4(lactate dehydrogenase C4,LDH-C4),它特异地存在于哺乳动物发育成熟的睾丸组织中,是精子能量代谢的一个关键酶,与精子的生成、代谢、获能等有密切关系。LDH-C4具有很强的免疫原性。动物实验表明,LDH-C4可在多种哺乳动物体内诱导抗LDH-C4抗体产生,后者可导致动物的生育率明显降低,且作用可逆。由于生殖道富含粘膜组织,利用LDH-C4的精子特异性及其良好的免疫原性,从粘膜途径进行DNA免疫有可能达到理想的避孕效果。本研究利用分子克隆技术,以小鼠睾丸总RNA为模板,PCR扩增小鼠精子特异性乳酸脱氢酶(mLDH-C4)编码序列,并将其插入真核表达载体pVAX1,构建真核重组表达载体pVAX1-mLDHC。利用HeLa细胞转染试验及兔网织红细胞T7快速偶联的转录/翻译系统检测pVAX1-mLDHC及pVAX1-hLDHC(本室制备好)的表达效果。采用粘膜途径免疫BALB/c小鼠(用空质粒pVAX1作对照),用Western blot与ELISA检测免疫动物血清及阴道分泌物。结果表明,所构建的DNA疫苗pVAX1-mLDHC、pVAX1-hLDHC可在雌雄两性小鼠体内及粘膜局部诱导产生特异性抗mLDH-C4或hLDH-C4抗体。LDH-C4对于雄性动物是一种自身抗原,但可能是血睾屏障的作用,雄性小鼠免疫接种后并没有产生睾丸炎。小鼠交配实验表明pVAX1-mLDHC、pVAX1-hLDHC所诱导的抗LDH-C4免疫反应均能引起小鼠生育率下
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