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目的:本研究以中医学理论为指导,采用现代中药药理学研究方法,探讨黄芪及其提取物对体外培养大鼠肺成纤维细胞增殖及转化生长因子-β(TGF-β)、肝细胞生长因子(HGF)表达的影响。为开发黄芪有效成分运用于临床防治肺纤维化提供实验依据。
方法:SPF级wistar大鼠60只,雌雄各半,体重180±20g,根据现代中药药理学方法分组制备含药血清。分离、培养并鉴定大鼠肺成纤维细胞,取第3-5代生长良好者,随机分为6组:黄芪煎液组,黄芪总皂苷组,黄芪总黄酮组,黄芪多糖组,地塞米松对照组,空白对照组,加入各组相应血清。免疫组化法鉴定肺成纤维细胞;台盼蓝排斥试验法测定细胞活力;MTT法检测黄芪及其提取物对肺成纤维细胞增殖的影响;免疫组化法检测黄芪及其提取物对肺成纤维细胞中TGF-β、HGF表达的影响。
结果:细胞鉴定:波形蛋白表达阳性,结合组织来源与细胞生物学特性确认为肺成纤维细胞。细胞活力测定:细胞活力>95%。MTT试验:与空白对照组比较:48~96h时,各药物组均能明显抑制肺成纤维细胞增殖(P<0.01)。药物作用时间在24~72h抑制强度随时间延长而加强,96h时抑制率未能进一步增加,呈饱和效应动力学特征。72h时各药物组对细胞增殖的抑制作用最强(P<0.01),且黄芪煎液组、黄芪总皂苷组及黄芪总黄酮组的抑制作用强于黄芪多糖组(P<0.01),其抑制率分别达到了:黄芪煎液组43.61%,黄芪总皂苷组38.81%,黄芪总黄酮组39.50%,黄芪多糖组28.31%。免疫组化试验:与空白对照组比较:黄芪煎液组、黄芪总皂苷组及黄芪总黄酮组细胞胞浆TGF-β、HGF的表达均有显著性差异(P<0.01),黄芪多糖组及地塞米松组均有差异(P<0.05);与地米对照组比较:黄芪煎液组、黄芪总皂苷组及黄芪总黄酮组TGF-β、HGF的表达均有差异(P<0.05),黄芪多糖组无明显差异(P>0.05);且黄芪煎液组、黄芪总皂苷组及黄芪总黄酮组的作用均优于黄芪多糖组(P<0.05)。
结论:黄芪及其提取物含药血清均能抑制体外培养大鼠肺成纤维细胞的增殖,同时能降低该细胞中促纤维化因子TGF-β的表达,升高抗纤维化因子HGF的表达,且黄芪煎液、黄芪总皂苷及黄芪总黄酮的作用效果优于黄芪多糖。表明黄芪及其提取物是预防和抑制肺纤维化发生、发展的有效药物,黄芪总皂苷和黄芪总黄酮是黄芪防治肺纤维化的主要有效成分。