耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin Resistant Staphylococcusaureus,MRSA)是医院内交叉感染的常见致病菌之一，因其对β-内酰胺类抗生素的抵抗及万古霉素疗效不佳而成为临床慢性持续感染的重要病原体。近年研究发现社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌肺炎(Community-acquiredMRSA，CA-MRSA)发病率渐增高，死亡率高，流行病学调查倾向认为金黄色葡萄球菌杀白细胞毒素(Panton-Valentine Leukocidin，PVL)与此相关。医院内感染株也携带PVL基因，且引起重症肺炎及慢性持续感染之MRSA菌株中PVL基因阳性率高于社区获得性MRSA。研究已发现PVL作用于多形核中性粒细胞，形成膜孔道，诱导释放炎症因子、细胞坏死等，参与坏死性肺炎的发生。人肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages，AMs)作为肺内主要的天然免疫细胞，其通过表达膜受体CD14、TLR(Toll like receptor)和分泌炎症细胞因子介导免疫功能，诱导其免疫功能下降甚至缺失被认为是细菌逃逸免疫的重要机制之一。PVL对单核巨噬细胞也具有特异性损害作用，但其对人AMs的免疫功能损害及其细胞因子分泌的影响尚不清楚。新近研究倾向于PVL在金葡菌致重症肺炎及慢性持续感染中起作用，致病机制却有待进一步确定。
　　 目的：
　　 本实验拟观察重组PVL(recombinant-PVL,rPVL)对人AMs CD14/TLR2表达及炎症因子分泌的影响，以探讨PVL(+)金葡菌逃逸宿主免疫引起重症肺炎或慢性持续感染的机制，为葡萄球菌肺炎的治疗进展提供理论依据。
　　 方法：
　　 基因工程方法提取高纯度rPVL。收集我院2008年3月～2008年9月期间符合入选条件行纤维支气管镜检查的患者，于右肺中叶或左肺舌叶行支气管肺泡灌洗，从灌洗液中分离纯化培养AMs。rPVL作用于体外培养之AMs，通过形态学观察、聚合酶链式反应技术及双抗体夹心酶联免疫吸附技术，观察rPVL对AMs细胞形态、CD14/TLR2表达及炎症因子分泌的影响。
　　 结果：
　　 1、重组PVL毒素纯度高，无内毒素污染，具有细胞毒活性。
　　 2、光学显微镜下见低浓度(10nM)短时间(6小时)rPVL诱使细胞呈凋亡改变；而高浓度(100nM)长时间(24小时)rPVL致细胞呈坏死性改变。
　　 3、rPVL作用后AMs CD14 mRNA下降，降低幅度随时间延长和毒素浓度升高而增加。
　　 4、rPVL长时间(24小时)作用后AMsTLR2 mRNA上升。
　　 5、rPVL短时间(6小时)作用于人AMs，高、低浓度均未引起炎症细胞因子变化；长时间(24小时)作用于人AMs，低浓度组IL-10升高而TNF-α降低，高浓度组IL-10和TNF-α均升高。
　　 结论：
　　 1、rPVL对人AMs有细胞毒性。
　　 2、rPVL可诱导人AMs凋亡和坏死改变，降低细胞免疫。
　　 3、rPVL诱导人AMs CD14表达下降，效应呈浓度时间依赖性，降低细胞免疫。
　　 4、rPVL长时间可诱导人AMs TLR2上调，进一步诱导细胞凋亡
　　 5、rPVL诱导人AMs细胞因子释放紊乱，引起细胞免疫抑制或紊乱。
　　 总之，rPVL促AMs凋亡或坏死，并下降CD14上调TLR2致两者表达分离，抑制其吞噬和免疫反应功能。rPVL同时诱导促炎因子及抑炎因子平衡失调，引起细胞因子免疫紊乱，这些综合效应构成PVL(+)金葡菌逃避宿主免疫引起重症肺炎或慢性持续感染的机制之一。