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目的:建立子宫巨噬细胞的分离鉴定方法;在组织和细胞水平上,研究小鼠孕早期子宫巨噬细胞的分布、数量和内部磷酸酶表达量的变化,探讨巨噬细胞在孕早期的变化和功能。
方法:取性发育成熟的雌鼠,以妊娠第1至第7天(D1-D7)的小鼠为试验组,动情期雌鼠为对照组,从子宫中分离巨噬细胞,分别用免疫组织化学方法和酶细胞化学方法研究妊娠早期子宫内巨噬细胞的分布与数量变化及细胞内酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的变化。
结果:(1)以机械、酶消化法分散细胞,密度梯度离心初步分离巨噬细胞,再进行贴壁纯化,采用瑞氏染色、非特异性酯酶、酸性磷酸酶、免疫细胞化学等多种方法来鉴定,结果表明本实验总结出一套简单易行的子宫巨噬细胞分离鉴定方法。(2)CD14定位于巨噬细胞膜上,CD14+巨噬细胞在小鼠动情期主要分布在子宫内膜,妊娠后内膜巨噬细胞数目减少,D3最少(4.3±3.73)(P<0.01),D4以后恢复正常;妊娠后子宫肌膜巨噬细胞数目增多,D2达到高峰(48.3±11.3),D3又有所下降,D4以后持续保持较高水平(P<0.01),CD14免疫反应阳性面积变化趋势与此相同,但变化幅度比阳性细胞数小;子宫外膜巨噬细胞在动情期数目最少,妊娠后开始增加,D2达到高峰,D3有所下降,D4以后趋于稳定,都高于对照组(P<0.01),CD14免疫反应阳性面积变化趋势与此类似。(3)酶组织化学方法显示D1-D2小鼠子宫巨噬细胞酸性磷酸酶含量升高,D2-D5含量下降,之后又开始回升,但与对照组相比,差异不明显(P>0.01);碱性磷酸酶妊娠后开始升高,实验组的小鼠全部高于对照组(P<0.01)。
结论:本实验总结的细胞分离和鉴定方法具有简单易行、成本低廉的特点,这为进一步研究子宫巨噬细胞奠定了基础;巨噬细胞在妊娠早期的分布、数量及CD14的量都发生变化,提示其可能在母胎免疫耐受中发挥重要作用;妊娠早期,巨噬细胞磷酸酶的表达也发生着变化,提示巨噬细胞在妊娠过程中发挥效应可能与磷酸酶有关。