【摘 要】
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近年来在珍珠质基质蛋白基因及其它矿化相关功能基因的分离、鉴定、表达及功能等方面已做了一定的工作.但在上述基质蛋白的测序鉴定、表达及功能等方面的研究工作进展缓慢.该
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近年来在珍珠质基质蛋白基因及其它矿化相关功能基因的分离、鉴定、表达及功能等方面已做了一定的工作.但在上述基质蛋白的测序鉴定、表达及功能等方面的研究工作进展缓慢.该研究以中国培育海水珍珠的最主要贝类合浦珠母贝(Pinctada fucata)为实验材料,对其体内的珍珠质基质蛋白进行研究:利用已知短序列设计引物,通过PCR技术进行扩增,再以扩增了的序列做探针,在cDNA文库中进行筛选,以期获得该类基质蛋白中某种蛋白的目的基因,进而进行原核表达研究和表达蛋白对体外碳酸钙结晶、成骨细胞增殖和分化的影响等研究.结果表明:1.分离鉴定了一种新的与合浦珠母贝珍珠质生物矿化相关的全长基因GRMP.2.经鉴定GRMP编码的珍珠质基质蛋白GRMP(Glycine-rich matrix protein)与Nature(1997)报道的珍珠质基质蛋白MSI31具有很高同源性.GRMP的特点是分子量较小,但含有MSI31中结合钙离子的关键区域.3.原位杂交(In situ hybridization)实验表明,GRMP基因在合浦珠母贝外套膜的上皮细胞中特异表达,从而进一步证明GRMP是外套膜上皮细胞分泌的珍珠质基质蛋白.4.通过对该基因进行体外表达和体外碳酸钙结晶试验,证明GRMP影响碳酸钙的结晶形态与结晶速度,从而推断GRMP可能在碳酸钙的生物矿化过程中起十分重要的作用.5.合浦珠母贝GRMP蛋白在体外对成骨细胞有促增殖作用.6.合浦珠母贝GRMP蛋白在体外提高成骨细胞的碱性磷酸酶的活性.
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