寻常型银屑病患者皮损及外周血中microRNAs表达的研究

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[目的]  1.筛选寻常型银屑病(PV)患者皮损及外周血中差异表达miRNAs。  2.探讨差异表达miRNAs与PASI评分相关性。  3.预测差异表达miRNAs的靶基因。  [方法]  1.收集21例PV患者血浆及皮损组织为实验组、7例健康人血浆及皮肤组织为对照组。  2.选取6例银屑病患者及3例健康人,提取血浆及皮肤中总RNA,利用Agilent Human miRNA芯片技术筛选差异表达miRNAs。  3.取剩余15例银屑病患者及4例健康人皮肤组织样本,利用qRT-PCR(实时荧光定量pcr)技术验证差异miRNAs与基因芯片结果是否一致。  4.分析差异表达miRNAs与银屑病PASI评分相关性。  5.应用生物信息学方法对差异表达miRNAs进行靶基因预测和分子功能分析。  [结果]  1.miRNA芯片检测  当P<0.05、FC>1.5时,与对照组比较,PV患者皮损中有150个差异表达miRNAs,其中82个表达上调,68个表达下调;血浆中有22个差异表达miRNAs,其中17个表达上调,5个表达下调;miR-6510-5p、miR-483-5p、miR-4778-5p、miR-4800-5p、miR-4298、miR-4669、miR-4534、miR-5195-3p、miR-1275等9个miRNAs在皮损和血浆中同时表达上调,而miRNA-3940-5p在皮损中表达上调但血浆中表达下调。  当P<0.01、FC>1.5时,与对照组比较,PV患者皮损中有90个差异表达miRNAs,其中60个表达上调,30个表达下调;血浆中有12个差异表达miRNAs,其中11个表达上调,1个表达下调;miR-6510-5p、miR-4298、miR-1275在皮损和血浆中同时表达上调,而miRNA-3940-5p在皮损中表达上调但血浆中表达下调。  2.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法验证  对上述部分差异性miRNAs(miRNA-6510-5p、miRNA-3940-5p、miRNA-1275、miR-483-5p)进行qRT-PCR验证,表达均上调,与miRNA芯片检测结果一致。  3.差异表达miRNAs与银屑病PASI评分相关性  miR-6510-5p、miR-3940-5p与PASI评分呈显著正相关(P<0.05),而miR-1275、miR-483-5p与PASI评分无明显相关(P>0.05)。  4.差异表达miRNAs靶基因预测和分子功能分析  由于基因库中暂无miRNA-6510-5p及miRNA-3940-5p相关靶基因,我们选择miRNA-1275、miR-483-5p,预测靶基因达到上千个;Pathway分类示靶基因功能涉及多种信号转导通路,如Toll样受体信号通路、细胞凋亡、MAPK信号通路、VEGF信号通路、T细胞受体信号通路等,不同miRNAs可同时参与调控同1个信号通路。  [结论]  1.PV患者皮损和血浆中存在100多个差异表达miRNAs(P<0.05、FC>1.5)。  2.miRNA-6510-5p、miRNA-3940-5p、miRNA-1275、miR-483-5p在miRNA芯片检测及qRT-PCR验证的结果一致,表达均上调;miR-6510-5p、miR-3940-5p可作为评价PV患者病情严重程度的指标。  3.差异表达miRNAs可能通过调控靶基因功能及信号转导通路,在银屑病发病机制中起重要作用。
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