白斑病对对虾水产养殖业造成巨大损失,其病原为白斑综合症病毒(white spotsyndrome virus,WSSV)。在侵染宿主的过程中,其囊膜蛋白VP28起着关键作用。有报道重组表达的VP28或表达VP28的质粒具有明显的抗病毒作用;而囊膜蛋白VP19在有些研究中表明其有抗病毒作用,也有的研究显示其无抗病毒作用。为了深入了研究VP28的抗病毒功能,寻找一种有效地防治方法,并确定VP19的功能,我们构建了分别含WSSV的ie1启动子和VP19或VP28的表达载体(pIevp28,pIevp28)。将载体分别注射克氏原螯虾后,通过实时定量PCR和蛋白质印迹等方法发现不同的质粒载体可以持续表达VP19或VP28,自第五天开始可以检测到较强的信号并持续至第三十天,同时在遭遇病毒的侵染之后,与对照组相比注射VP28质粒的螯虾感染病毒后死亡率明显下降,并且病毒在体内的复制被抑制。而VP19质粒虽然能够在螯虾体内转录,但不能抑制病毒的复制,死亡率与对照组亦无明显差异。免疫组织化学的结果显示VP28蛋白可以与血细胞的细胞膜结合,而VPl9则不能。根据上述结果,我们认为VP28可能是能通过竞争性抑制的作用对螯虾进行保护。饲喂含有该质粒的大肠杆菌(E.coli)同样可以降低螯虾的死亡率。这或许可以作为一种新的防治白斑病毒的方法加以应用。　　 而后我们考虑到该质粒是否可以用来表达螯虾蛋白以研究其功能,于是选择了来自克氏原螯虾的一种C-型凝集素来进行实验。C-型凝集素作为一种模式识别受体,在识别外来病原体侵染等方面起着非常重要的作用。在我们的研究中,从克氏原螯虾体内克隆到一种新型的C-型凝集素,称为PcLec4。PcLec4包括一个由17个氨基酸残基组成的信号肽和紧随其后的一个糖类识别结构域(carbohydraterecognition domain,CRD)。在螯虾受到白斑病毒或者鳗弧菌(Vibrio.anguillarum)的刺激之后,该C-型凝集素的mRNA水平上呈现明显的上调趋势。重组表达之后的该C-型凝集素蛋白不能凝集细菌,但是在体外细菌结合试验中,对无论革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌都表现出很强的结合活性。重组表达后的蛋白可以促进机体对侵入体内的鳗弧菌的清除,为了研究该凝集素的体内活性,我们利用含有白斑综合症病毒的即刻早期基因(immediate-early gene)中的ie1启动子核心区域的表达载体,将PcLec4的开放阅读框插入该质粒载体中ie1启动子之后。该载体经测试表明可以在螯虾体内过表达PeLec4,并且注射了该表达载体的螯虾与对照组相比,当鳗弧菌侵入后表现出更快的清除速度从而帮助机体抵御病原入侵。据我们所知到目前为止这是首次使用该这一质粒来表达一种螯虾的C-型凝集素来研究其功能。