艾迪注射液对不同恶性肿瘤细胞放射增敏作用及机制研究

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目的:观察艾迪注射液对三种恶性肿瘤细胞的辐射增敏效应,并探讨它对脑胶质瘤细胞SHG44的辐射增敏作用机制。方法:MTT法测定艾迪注射液对脑胶质瘤细胞株SHG44、非小细胞肺癌细胞株H460、肝癌细胞株HepG2的抑制作用;应用成克隆法观察艾迪注射液对三种细胞的放射增敏作用;流式细胞仪分析艾迪注射液对SHG44细胞株周期分布及凋亡率的影响;Western印迹法检测CyclinB1及Wee1蛋白在SHG44细胞株中表达的变化,利用Quantity One软件定量分析。结果:1.不同浓度的艾迪注射液(3-192mg/ml)对三种肿瘤细胞作用48h后均有增殖抑制作用,且随着浓度的增加细胞活性降低;2.艾迪注射液对三种肿瘤细胞均有明显的放射增敏作用。SHG44细胞株中,单纯照射组平均致死剂量(D0)、准阈剂量(Dq)分别为2.14及1.58;15mg/ml艾迪注射液作用细胞48h后行照射组D0、Dq值分别为1.50及1.09,辐射增敏比(SERD0)、SERDq分别为1.43及1.45;H460细胞株中,单纯照射组D0、Dq值分别为2.02及1.72;12mg/ml艾迪注射液作用细胞48h后行照射组D0、Dq值分别为1.72及1.26,SERD0、SERDq分别为1.17及1.37;HepG2细胞株中,单纯照射组D0、Dq分别为2.02及0.74;12mg/ml艾迪注射液作用细胞48h后行照射组D0、Dq分别为1.75及0.62,SERD0、SERDq分别为1.15及1.20;3.流式细胞仪对SHG44细胞周期和凋亡的检测结果显示:15mg/ml艾迪注射液增强6Gy辐射诱导的SHG44细胞G2/M期阻滞(R和D+R组的G2/M期比例分别为16.77%±1.10和26.86%±1.37,P<0.01)并增加凋亡率(R和D+R组的凋亡率分别为11.5%±0.53和32%±2.2,P<0.01);4.Western blot显示:艾迪注射液作用SHG44细胞后,细胞中CyclinB1蛋白表达量与对照组比较明显降低,Wee1蛋白表达量与对照组比较明显增高;药物与放射联合作用SHG44细胞后,CyclinB1蛋白表达量与放射组比较明显降低,Wee1蛋白表达量与对照组比较明显增高;Weel蛋白表达量与细胞G2/M期比例成正相关(r=0.941,P<0.05),CyclinB1蛋白表达量与细胞G2/M期比例成负相关(r=-0.945,P<0.05)。结论:1.艾迪注射液可提高SHG44细胞、H460细胞、HepG2细胞放射敏感性,艾迪注射液对恶性肿瘤的放射增敏作用可能具有普遍性;2.艾迪注射液对SHG44细胞的放射增敏作用可能与增强细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡,降低CyclinB1蛋白表达和增加Wee1蛋白表达有关;3.艾迪注射液增强SHG44细胞G2/M期阻滞可能与降低CyclinB1蛋白表达和增加Wee1蛋白表达有关。
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