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目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的乙型肝炎已成为全球严重的公共卫生问题之一。HBV感染者常常成为肝硬化和肝癌的高发人群。作为肝脏以外的主要致病器官之一,肾脏在乙肝病毒相关性肾炎(HBV-GN)的发病机制中逐渐受到关注。流行病学研究发现,一些HBV病毒携带者有累及肾脏并发展为肾炎的趋势,本中心前期回顾性分析了过去20年(1995年-2015年)肾脏病理类型疾病谱及其趋势,HBV-GN在继发性肾病中的诊断中较前呈上升趋势。目前国际上以肾组织切片中检测到HBV抗原或HBV-DNA作为HBV-GN重要的诊断依据,但现有的多种检测方法缺乏一定的灵敏度及特异性,发现HBV-GN免疫标志物长期以来一直是肾脏病理学家关注的焦点。乙型肝炎病毒X基因是位于HBV基因中的双链环状DNA分子的第四个开放阅读框,乙型肝炎病毒X蛋白(HBX蛋白)是体内病毒感染周期中的基本病毒蛋白,它可以直接和间接地作用于病毒和宿主细胞,并且与乙型肝炎相关性肾炎的发生和发展密切相系。本研究回顾性分析了102例乙型肝炎血清阳性肾组织中HBX蛋白的分布、HBV-DNA水平及与临床病理类型之间的关系。目的探讨HBX蛋白和HBV-DNA水平在肾小球肾炎伴乙肝病毒感染者肾组织中的表达及意义,旨在为寻找HBV-GN肾组织中可靠的检测指标提供理论依据。方法:1.收集病例及临床资料:选取我中心2013年1月-2015年12月乙肝病毒血清学阳性患者肾穿刺活检病例102例,收集患者的临床及实验室资料,包括:患者性别,肾活检时年龄及HBV感染相关指标:HBs Ag、HBe Ag、HBs Ab、HBc Ab、HBe Ab。2.102例肾穿刺活检组织临床病理类型分析:肾组织标本分为三部分,标本常规石蜡包埋后3μm切片,分别做光镜(HE、PAS、Masson、PASM染色)、免疫荧光(IF)和电镜(EM)检查。采用免疫组织化学法(IHC)检测肾组织中HBs Ag和HBc Ag的表达,分析不同病理类型组间的表达差别。3.肾组织HBX蛋白的表达:免疫组织化学法(IHC)检测肾组织中HBX蛋白的表达,并分析其在不同病理类型之间的表达差别。4.肾组织HBV-DNA含量的检测:通过Q-RT-PCR法检测HBV-DNA的含量,分析其在不同病理类型组间的表达差别。5.三种检测手段在HBV-GN诊断价值中的评估:比较HBX、HBs Ag、HBc Ag、HBV-DNA间的表达差异,结合其临床资料及病理学特点,进行回顾性统计分析以评估其在诊断乙型肝炎病毒感染相关性肾炎的诊断中的价值。结果:1.我中心收集的102例乙肝病毒血清学阳性患者中,22例为乙肝大三阳患者,其中3例处于DNA复制期。男性的发病率较女性略多,40岁左右更为常见。2.102例肾活检患者临床病理类型及HBs Ag、HBc Ag表达分析:(1)病理类型表现为多样性,包括:HBV-MN(膜性乙肝相关性肾炎)24例,UAMN(不典型膜性肾病)18例,IMN(特发性膜性肾病)24例,Ig AN(Ig A肾病)15例,MCD(肾小球微小病变)18例,FSGS(局灶节段性肾小球硬化症)2例,HBV-MPGN(膜增生性乙肝相关性肾炎)1例。(2)HBV-MN组HBs Ag、HBc Ag的阳性率分别为50%、62.5%,UAMN组HBs Ag、HBc Ag的阳性率分别为16.67%、22.22%;IMN组HBs Ag、HBc Ag的阳性率分别为12.50%、33.33%;1例HBV-MPGN患者仅表达HBc Ag;Ig A组、MCD组、FSGS组未检测到HBs Ag、HBc Ag的表达。3.HBX蛋白在102例血清学阳性患者肾组织中的表达:(1)71例(69.6%)阳性表达,呈棕色颗粒状沉积于肾小球足细胞、上皮下毛细血管袢及肾小管上皮细胞胞质内,所有阳性病例主要表达于肾小管上皮细胞,伴有不同程度的毛细血管袢及足细胞的表达。(2)25例HBV-GN组HBX蛋白的阳性表达率为80.00%,其中HBV-MN肾组织HBX阳性表达率为83.33%(20/24例),高于IMN组50.00%(12/24例);UAMN组HBX的阳性表达率约为83.33%(15/18例),Ig AN、MCD组的阳性率分别为46.67%(7/15例)、83.33%(15/18例),1例HBV-MPGN未检测到HBX蛋白的阳性表达,2例FSGS均检测到HBX的阳性表达。(3)“大三阳”组HBX蛋白的阳性表达率约为81.82%(18/22例),“大三阳”组与“非大三阳”组之间肾组织的HBX蛋白阳性表达率无显著差异。(4)3例DNA复制期肾组织均可检测到HBX蛋白不同程度的表达。4.102例血清学阳性患者肾组织中HBV-DNA的检测:(1)通过Q-RT-PCR法检测出24例(23.53%)患者肾组织中HBV-DNA阳性表达,HBV-GN组与非HBV-GN组的阳性率差异有统计学意义(P<0.001)。(2)“大三阳”组肾组织的HBV-DNA阳性表达率为45.45%(10/22例)。(3)“大三阳”组与“非大三阳”组肾组织的HBV-DNA阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。(4)3例DNA复制期肾组织均检测到HBV-DNA的表达。5.三种检测手段在HBV-GN诊断价值中的评估:(1)HBX蛋白在肾组织中的阳性表达率高于HBs Ag和HBc Ag,且在UAMN组(P<0.001)、Ig AN组(P<0.001)和MCD组(P<0.001)差异具有统计学意义。(2)25例HBV-GN患者肾组织中,HBX与HBs Ag、HBc Ag的阳性表达率分别为83.33%、50.00%、64.00%,组间差异无统计学意义。(3)102例乙肝血清学阳性肾组织中HBX蛋白的阳性表达率高于HBV-DNA,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:1.HBV感染引起的肾小球肾炎是我国继发性肾小球肾炎的主要病理类型之一,其中膜性肾病最常见。HBX蛋白在乙肝病毒血清学阳性患者肾组织中以肾小管上皮细胞胞浆沉积为主。2.在乙肝病毒血清学阳性患者肾组织中,HBX蛋白的阳性表达率高于HBs Ag、HBc Ag;HBX蛋白的阳性表达率高于HBV-DNA,差异有统计学意义(P<0.001)。通过免疫组织化学法检测HBX蛋白表达可以为乙肝病毒感染相关性肾炎的病理诊断提供更多依据。