养营活血汤对肝纤维化大鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响

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目的1.基于Wnt/β-catenin信号通路,通过肝纤维化相关指标的检测研究养营活血汤对Wnt1,β-catenin,TGF-β1的影响,探讨养营活血汤抗肝纤维化的作用机制;2.阐明养营活血汤抗肝纤维化的分子机制,丰富肝纤维化营虚血瘀的病机内涵,为研究养营活血汤抗肝纤维化提供理论支持和实验依据。方法1.SPF级成年Wistar大鼠(体重180220g)60只,雌雄各半,随机平均分为正常对照组,模型对照组,养营活血汤高、中、低剂量治疗组,秋水仙碱治疗组6组。除正常对照组外,其余5组均采用复合型肝纤维化大鼠造模方法(40%的CCL4石蜡混合油联合猪血清)造模,8周后建立大鼠肝纤维化模型;2.各组大鼠给予相应药物干预治疗8周;3.麻醉后腹主动脉取血,检测大鼠血清相关肝脏生化指标(ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C);制作各组大鼠肝组织病理切片,进行HE染色和Masson染色,观察?对比其病理结果;利用实时荧光定量PCR法检测Wnt1,β-catenin,TGF-β1m RNA的表达水平,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Wnt1,β-catenin,TGF-β1的蛋白表达。结果1.与正常组相比,模型组肝组织病理改变明显,血清ALT、AST含量上升;与模型组对比,不同剂量养营活血汤和秋水仙碱均可改善肝纤维化大鼠肝组织的病理变化,而且血清ALT、AST含量显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。2.不同剂量养营活血汤及秋水仙碱均可降低大鼠血清肝纤维化标志物HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C值,且高剂量组大鼠血清肝纤维化指标较秋水仙碱组显著降低(P<0.05)。3.RT-PCR和Western blot的结果显示:用养营活血汤干预的大鼠肝组织内Wnt1、β-catenin、TGF-β1在m RNA和蛋白质表达水平上均低于模型组大鼠。而且高剂量组表达较秋水仙碱组显著降低(P<0.01)。结论养营活血汤可通过下调或抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活过程,降低Wnt1、β-catenin、TGF-β1的m RNA和蛋白的表达水平,降低大鼠肝纤维化相关血清指标,从而达到抗肝纤维化的作用,且养营活血汤高剂量组效果较为显著。
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