猫传染性腹膜炎病毒（Feline infectcious peritonitis virs,FIPV）是一类导致猫传染性腹膜炎的高致病力、高致死率的传染病,属猫冠状病毒（Feline Coronavirus,FCo V）。随着养猫人士越来越多,对于猫的传染性疾病越来越受关注,冠状病毒检测和治疗尤其受到重视,研究猫FIPV也对以后预防动物疾病和公共卫生都可以起到积极作用。单链抗体（single chain fragment variable,sc Fv）近些年广泛用于免疫学诊断、抗病毒药物靶点筛选等各个领域,筛选针对FIPV的sc Fv能为猫冠状病毒的免疫学检测诊断和治疗奠定基础。本研究体外构建出p ET-32a-FIPV-N后转化至大肠杆菌T7 shuffle感受态细胞进行原核表达,表达出可溶性的FIPV-N蛋白作为抗原免疫实验兔,经四次免疫后测得效价达到1.2×10~5。提取免疫后兔脾脏RNA,逆转录为c DNA,PCR扩增抗体重链可变区和轻链可变区目的基因,继而使用SOE-PCR拼接成sc Fv基因。将sc Fv目的片段与载体p Comb3XSS相连,形成p Comb3XSS-sc Fv质粒,质粒电转至ER2738感受态细胞后,用M13K07辅助噬菌体侵染,构建出兔源噬菌体单链抗体库,库容达到6×10~8 cfu/m L。以N蛋白为靶蛋白进行淘选,将生物素化的N蛋白与链霉亲和素磁珠进行孵育结合,淘洗磁珠,并将特异性结合的噬菌体进行洗脱。2轮的富集筛选后phage-ELISA鉴定出11株强阳的（P/N＞3）sc Fv菌株,测序结果显示成功筛出3株特异性sc Fv。选取一株测序结果成功的sc Fv克隆至真核载体p TT5-Human-Fc上转染至HEK 293F细胞系真核表达,通过Protein A纯化,获得重组Fc-sc Fv-N抗体。通过ELISA检测重组抗体亲和力,其亲和力EC50为7.938 ng/m L,表明该重组抗体具有活性且亲和力良好。本研究筛选出的特异性的sc Fv可为进一步研究其对FIPV感染的抑制作用及其临床应用前景打下基础。