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目的:溴代阻燃剂多溴联苯醚(Polybrominated diphenyl ethers,PBDEs)的神经毒性受到人们的广泛关注,已有证据表明PBDEs神经毒性与自噬异常有关,但具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨环境和人体中含量最多、毒性最强的PBDEs同系物之一的2,2’,4,4’-四溴联苯醚(2,2’,4,4’-tetrabromodiphenylether,PBDE-47)对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞溶酶体功能和自噬流的影响,同时阐明转录因子EB(Transcription factor EB,TFEB)在PBDE-47致PC12细胞损伤中所扮演的角色,从而为进一步研究PBDEs神经毒性的机制及治疗提供实验依据。方法:不同剂量PBDE-47(1、10、20μmol/L)处理PC12细胞24 h后,采用western blot检测TFEB、溶酶体相关膜蛋白1(lysosome-associated membrane glycoprotein 1,LAMP1)、溶酶体内和溶酶体外及总组织蛋白酶B(cathepsin B,Cat-B)、以及突触体相关蛋白29(Synaptosomal-associated protein 29,SNAP29)、突触17(Syntaxin 17,STX17)、囊泡相关膜蛋白8(Vesicle-associated membrane protein 8,VAMP8)等自噬体与溶酶体融合关键蛋白的蛋白表达水平;实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR Detecting System,qPCR)检测TFEB mRNA表达水平;Lysotracker染色后,利用荧光显微镜检测溶酶体pH;转染Ad-mCherry-GFP-LC3B后使用共聚焦显微镜观察自噬体与溶酶体融合情况。TFEB腺病毒过表达后观察LAMP1、Cat-B、自噬体和溶酶体融合关键蛋白、自噬相关蛋白7(Autophagy-related protein 7,ATG7)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、自噬选择性底物p62等蛋白表达水平和溶酶体pH值的变化情况,同时利用CCK8检测细胞存活率。结果:与对照组相比,PBDE-47染毒组胞质内Cat-B蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而溶酶体内Cat-B蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。免疫荧光结果显示,对照组红色斑点较多且明亮,随着PBDE-47染毒剂量的增加,PBDE-47染毒组红色斑点数量逐渐减少且变得黯淡。共聚焦显微镜结果显示,对照组呈现出弥散的黄色荧光,随着PBDE-47染毒浓度的增加,PBDE-47染毒组细胞体积缩小,弥散的黄色荧光减少,红色斑点变多,20μmol/L PBDE-47组出现了明显的黄色斑点。与对照组相比,10μmol/L及20μmol/L PBDE-47组SNAP29、STX17、VAMP8、LAMP1以及TFEB蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),而TFEB mRNA表达水平显著升高(P<0.05),同时1μmol/L、10μmol/L及20μmol/L PBDE-47染毒组中,总Cat-B蛋白表达水平均显著下降(P<0.05)。TFEB腺病毒过表达后,与AdV+PBDE-47组相比,Ad-TFEB+PBDE-47组细胞溶酶体与自噬体融合关键蛋白SNAP29和VAMP8、溶酶体相关蛋白LAMP1和Cat-B、自噬相关蛋白ATG7表达水平显著升高(P<0.05),LC3Ⅱ蛋白表达水平显著下降(P<0.05),p62蛋白表达水平尚未见显著改变;此外,lysotracker染色和CCK8结果也显示,与AdV+PBDE-47组相比,Ad-TFEB+PBDE-47组红色斑点数量更多、更加明亮,且存活率显著上升(P<0.05)。结论:PBDE-47可导致溶酶体功能损伤及自噬体-溶酶体融合障碍,过表达TFEB可缓解溶酶体功能损伤并恢复自噬流,最终提高细胞存活率。