反相高效液相色谱(RP-HPLC)因其强大的分离分析能力被广泛应用于许多研究和应用领域如分析化学、生物化学、临床医学、药物化学、食品卫生和环境监测等。其超强的分离能力使之成为诸多领域积极采纳的分析手段之一,并成为分析化学中发展最快、应用广泛的研究领域之一。然而,对于反相液相色谱的并没有合适的高灵敏的通用检测器,研究人员一直采用化学衍生化来提高分析物检测灵敏度,同时能够改善分离。新型衍生化试剂的开发和新型衍生化试剂在高效液相色谱中的应用研究一直是色谱领域中最为活跃的研究方向之一。本论文重点研究了几种新荧光衍生试剂的设计合成和表征,考察了试剂的光谱性质,优化了衍生反应条件、色谱分离条件,建立相应的反相高效液相色谱分析方法,并应用于多种有意义的实际样品的分析中。具体工作内容如下:第一章:简述了高效液相色谱和高液相色谱质谱联用研究进展。介绍了化学衍生化,荧光衍生化及其最新研究进展。最后概述了柱前衍生高效液相色谱分析的应用进展,以及计算机辅助方法建立在柱前衍生高效液相色谱方法建立中的意义和研究进展。第二章:总结了荧光衍生试剂的设计思路,进行了荧光衍生试剂:10-乙基吖啶酮-2-磺酰氯(EASC)、10-乙基吖啶酮-2-磺酰肼(EASH)等吖啶酮磺酰氯类荧光衍生试剂的设计合成和表征、5-(2-羟乙基)苯并[b]吖啶酮(HEBA)等苯并吖啶酮类衍生试剂的设计合成和表征,荧光衍生试剂苯并香豆素-3-羧酸的设计合成。第三章:荧光衍生试剂EASC用于雌激素的高效液相色谱.质谱分析。通过对衍生化条件、色谱分离条件、质谱检测条件的优化,分别建立了柱前衍生高效液相色谱质谱检测的方法和柱前衍生高效液相色谱荧光检测方法,并将两种方法应用于血浆、尿样、藏羚羊粪便等实际样品的测定,实现了这些样品中激素雌二醇和雌三醇的高灵敏质谱检测和荧光检测。该试剂的衍生产物物在紫外、荧光和质谱的检测灵敏度高于常用的试剂丹磺酰氯衍生产物的检测灵敏度。第四章:荧光衍生试剂EASC用于胺类化合物的高效液相色谱-质谱分析。通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化,建立了多种脂肪胺的柱前衍生反相高效液相色谱荧光检测方法,并将该方法应用于环境水样中脂肪胺的测定,实现了环境样品中脂肪胺的高灵敏检测。探讨了该试剂衍生物的质谱增敏机理,并通过软件计算对其质谱增敏程度进行了预测估计。第五章:荧光衍生试剂10-乙基吖啶酮-3-磺酰肼,通过对衍生反应、色谱条件的优化,建立了多种脂肪醛类化合物同时测定的柱前衍生高效液相色谱分离荧光检测分析方法,并同时进行了柱后质谱检测分析,并将此方法成功应用于饮料酒中脂肪醛的检测中。第六章:设计开发了一种醛类化合物测定的新型衍生化反应,通过对衍生反应、色谱分离条件的优化,建立了多种脂肪醛类化合物同时测定的柱前衍生高效液相色谱分离荧光检测分析方法。第七章:荧光衍生试剂5-(2-羟乙基)苯并[b]吖啶酮(HEBA),通过对衍生化条件和色谱分离条件的优化,建立了20种脂肪酸的柱前衍生化高效液相色谱荧光检测法,并将方法应用于食品木耳中脂肪酸的测定,实现了木耳样品中20种脂肪酸的色谱分离和高灵敏检测。