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鸭疫里默氏杆菌是一种革兰氏阴性菌,属于黄杆菌科。鸭疫里默氏杆菌主要感染鸭、鹅、火鸡等其它一些禽类,引起浆膜炎。该病在世界范围内常有发生和流行,给养鸭业带来了巨大的经济损失。由于缺乏相应的基因操作工具,对鸭疫里默氏杆菌的生理及致病机制的研究进展缓慢。针对上述问题,本研究构建了能够用于鸭疫里默氏杆菌的穿梭质粒并对其进行了应用验证,主要结果如下:1.大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭质粒的构建将鸭疫里默氏杆菌的质粒上面的复制起点克隆在可以在大肠杆菌中稳定存在的质粒pMM47.A上,成功构建出大肠杆菌-鸭疫里默氏杆菌穿梭质粒pLMF01。质粒稳定性试验表明,该质粒可以在鸭疫里默氏杆菌稳定存在。质粒在鸭疫里默氏杆菌的拷贝数约为33。分别将高、中、低表达的启动子克隆到pLMF01,构建出具有高、中、低表达特点的穿梭质粒pLMF03、pLMF04、pLMF05。2.RAATCC株tonB1基因的功能回补验证将tonB1基因分别克隆到高、中、低表达质粒pLMF03、pLMF04、pLMF05上面,之后再通过接合转移的方式将质粒转入tonB1基因的缺失株RA ATCC11845ΔtonB1,构建出具有高、中、低tonB1基因表达量的回补株。荧光定量试验和Western-blot表明,tonB1基因表达量在pLMF03最高,在pLMF05最低。血红素利用试验表明,穿梭质粒能够用于tonB1基因的回补且随着表达量的升高,血红素利用能力也相应提高。3.RAATCC株tbfA基因的功能研究在之前的研究中,经过多次产生尝试对tbf A（tonB3）基因进行敲除但未成功。本研究使用穿梭质粒通过过表达和干扰的方式对tbf A基因功能进行研究。血红素利用试验表明,在RA ATCC11845ΔtonB1ΔtonB2及RA ATCC11845过表达tbf A严重抑制了血红素的利用,而干扰tbf A对血红素的利用并没有明显影响。推测,tbf A并没有参与血红素的利用,且有可能Tbf A与Ton B1或Ton B2竞争Exb B-Exb D复合物抑制血红素的利用。4.穿梭质粒在RA CH-1中的回补应用为了证明该系列穿梭质粒能够广泛应用于鸭疫的各个血清型当中,在RA CH-1ΔB739＿1208缺失株当中转入回补质粒pLMF03::B739＿1208,在之前的研究表明该基因的缺失影响了细菌对于铁离子的利用,回补了目的基因之后恢复了铁离子利用能力,证明该系列穿梭质粒能够用于RA各个血清型缺失基因的回补。