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目的体外扩增野生型PTEN基因，克隆至真核表达载体pEGFPN1，转染至骨肉瘤MG63细胞系，并表达出PTEN蛋白。利用此真核表达载体，为进一步探讨PTEN基因在骨肉瘤发生及转移中的价值提供实验基础。方法①pEGFPN1/PTEN真核表达载体的构建及鉴定：收集、纯化人淋巴细胞，在无菌、无RNA酶的条件下利用Trizol试剂提取出淋巴细胞总RNA。利用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增出PTEN基因片段，电泳分析结束后回收纯化PCR产物，将PCR产物与空白质粒pEGFPN1同时进行双酶切，两种酶切产物经高保真T4DNA连接酶作用后，转化入感受态大肠杆菌TOP10，LB琼脂平板中培养过夜。经PCR初筛，阳性克隆通过PCR、双酶切和测序的方式对重组载体进行鉴定，测序结果使用BLAST软件与GeneBank数据库进行同源性分析。②MG63细胞的转染和重组人PTEN蛋白的表达及检测：取纯化除菌的重组质粒pEGFPN1/PTEN，在转染试剂Lipofecta mineTM2000的作用下转染至MG63细胞。通过倒置荧光显微镜观察GFP绿色荧光蛋白的表达情况了解转染效率。转染48h后收集细胞，RT-PCR和Westernblot鉴定PTEN mRNA和蛋白在MG63细胞中的表达情况。结果①反转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增成功获得一具有1209bp完整开放读码框的PTEN的cDNA片段。成功地将其克隆入真核表达载体pEGFPN1；将构建载体pEGFPN1/PTEN做EcoRI、BamH I双酶切和PCR，分别获得了一个大小与其相应PCR扩增产物一致的插入片段；经测序及Blast分析鉴定重组质粒构建成功。②脂质体法转染MG63细胞24小时后可见绿色荧光蛋白的表达，48小时后收集转染细胞，RT-PCR和Western blot鉴定重组PTEN真核表达载体在MG63细胞中能表达出PTENmRNA和蛋白，电泳图上可见于PTEN大小相一致的条带，Western结果在54kD处可见阳性条带。结论成功地从人淋巴细胞基因组DNA中获取了PTEN基因，成功构建了pEGFPN1/PTEN真核表达质粒，RT-PCR及Western-blot表明，pEGFPN1/PTEN真核表达载体在MG63细胞中获得了高效表达。本研究为PTEN在骨肉瘤中表达突变缺失的进一步研究创造了条件。