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胃癌是我国死亡人数最高的消化系统恶性肿瘤。化疗失败是导致手术后胃癌患者死亡的主要原因。这是因为肿瘤细胞具有原发性或继发性多药耐药(multidrug resistance, MDR)现象。已发现的耐药相关分子(诸如P-gp、MRP、LRP、BCRP、GST、PKC、TopoⅡ等)尚不能完全解释胃癌的MDR，提示胃癌细胞中存在着未知的耐药分子和耐药机制。MGrl-Ag是本研究所借助杂交瘤技术在胃癌长春新碱耐药细胞SGC7901／VCR上发现的耐药相关分子。先前的研究证实，MGrl单克隆抗体可部分逆转SGC7901／VCR细胞的多药耐药性。深入探讨MGrl-Ag的功能及其作用机制，将有助于全面理解胃癌MDR的发生和调节机制。 目的：了解MGrl-Ag在胃癌组织及正常胃组织中的表达分布和意义，观察MGrl-Ag在部分胃癌耐药及药敏细胞系中的表达水平，制备MGrl-Ag表达上调和下调的胃癌细胞亚系，探讨MGrl-Ag在胃癌MDR的发生和调节过程中的作用及其分子机制。 方法：1)利用组织芯片和免疫组化检测MGrl-Ag在胃癌组织及正常胃组织中的表达和分布。2)Western blot检测MGrl-Ag在部分胃癌耐药及药敏细胞系中的表达水平。3)通过RT-PCR从胃癌耐长春新碱细胞系SGC7901／VCR中扩增MGrl-Ag的编码cDNA，将PCR产物克隆入pUCm-T 第四军医大学硕士学位论文载体，经酶切鉴定并以测序证实。4）将MGr1Ag的编码CDNA亚克隆入pcDNA3．1，VS－His 载体构建MGrl人g 的真核表达载体pcDNA3二／MGrl－Ag，将MGrl＊g的编码cDNA反向亚克隆入pcDNA3．l／VS－His载体构建＊o1－＊ 的反义RN A表达载体pC＊＊＊3．1／Ch＊GC卜＊。5 ）借助脂质体将真核表达载体pcDNA3二／MGr1Ag转入MGC803细胞，将反义RNA表达载体转入SGC7901／VCR细胞，同时将空载体pCDNA3。l／VS－HIS转入MGC803细胞和SGC7901／VCR细胞作为对照细胞株。6）通过Westernblot检测MGrlAg在转染细胞中表达水平的改变。7）通过MTT法绘制转染细胞及其对照细胞的细胞生长曲线。8）通过流式细胞仪分析转染细胞其对照细胞的细胞周期，并计算细胞的增殖指数一roliferous index，PI人9）通过MTT试验进行体外药物敏感性分析，比较转染细胞及其对照细胞对阿霉素等8种化疗药物敏感性的差异并计算细胞对化疗药物的IC50值。10）借助流式细胞仪比较阿霉素在转染细胞及其对照细胞中蓄积和潞留的差异，并以Western blot检测药物转运相关蛋白卜gp和MRP在转染细胞及其对照细胞中表达水平的差异。11）借助 Annexin／PI染色对转染细胞及其对照细胞的细胞凋亡差异进行分析并计算细胞凋亡指数，以 Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl－2和Bax在转染细胞及其对照细胞中表达水平的差异。 结果：I）免疫组化结果表明，在144例胃癌组织中，MGrl叭g阳性92例历3．89％人在 72例正常胃组织中，MGrl叭g阳性 52例枯0．56％人MGrlAg在胃癌组织及正常胃组织中的阳性表达率有显著差异p刀5入其中分化程度诊断明确的病例有68例，高分化腺癌阳性表达率为83．33％；中分化腺癌阳性表达率为62．50％；低分化腺癌组织阳性表达率为58．97％；其中morlag在高分化和低分化腺癌组织中的阳性表达率具有显著差异（＜0刀1X而在中分化和低分化腺癌组织中的 MGrl人g阳性表达率无显著差异p 0刀5＼在癌组织浸润胃壁全层的病例中MGrl叭g阳性表达率为 3 第四军医大学硕士学位论文82．35％；癌组织浸及浆膜层的阳性表达率为57，14％；癌组织浸及肌层的阳性表达率为47．83％；癌组织浸及粘膜下层的阳性表达率为25．00％，MGr IAg在不同浸润程度的胃癌组织中的阳性表达率有显著差异（功刀匀。2）Western blot结果显示，MGrl人g在胃癌耐长春新碱细胞系SGC7901／VCR和耐阿霉素细胞系SGC7901帆R的表达明显高于胃癌药敏细胞系SGC旭m、MGC803、AGS、W 5；而在胃癌药敏细胞系中以MGC803细胞系的MGrl叭g的表达为最低。3）通过RTPCR克隆了MGrlAg基因全长序列，并且测序证实无误。4）通过 Western blot证实，转染正义真核表达载体的细胞MGC803MGrl－Ag中MGrl－Ag的表达明显高于空载体转染细胞 MGC803／pCDNA3＊及其亲本细胞 MGC803；转染反义RNA表达载体的细胞SGC7901／VCR－antiMGrl叭g中MGr1Ag的表达明显低于空载体转染细胞SGC790lfVCR中CDNA3＊ 及其亲本细胞SGC7901／VCR。5）流式细胞仪检测结果显示，MGC803 ／M／M GrGrl－Ag细胞与对照细胞相比，细胞周期缩短，增殖加快；而SGC7901／VCR个CDNA3l细胞与对照细胞相比，细胞周期延长，增殖减慢。6）体外药物敏感性分析结果显示，与对照细胞相比，MGC803／MGri叭g细胞对阿霉素、丝裂霉素。环磷酚胺、顺铂、长春新碱，足叶乙贰的敏感性明显降低；而SGC7901／VCR－antiMGrlAg细胞对上述药物的敏感性明显升高。7）流式细胞仪检测细胞内阿霉素的蓄积和醋留显示，与对照细胞相比，MGC803肋GrlAg细胞内药物的蓄积和缩留明显减少，药物泵出率增大；