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研究背景脂肪酸水平升高在非酒精性脂肪肝的发病中具有重要作用。非脂肪组织中脂质沉积导致细胞功能异常甚至细胞损伤称为脂毒性。有研究显示,不同性质的脂肪酸其脂毒性是不同的。本研究分别用不同浓度的油酸(不饱和脂肪酸)、软脂酸(饱和脂肪酸)作用于肝细胞株L02,建立脂肪变性的肝细胞模型;探讨不同性质脂肪酸对脂肪变性肝细胞凋亡、GRP78表达的影响。方法1.采用不同浓度的油酸、软脂酸诱导肝细胞株L02,建立肝细胞脂肪变性的模型。2.实验分组:正常对照组、DMSO组、软脂酸、油酸处理组。3. MTT法[1]筛选软脂酸和油酸对L02细胞的最佳作用浓度和作用时间。4.油红O染色光镜下观察细胞内脂滴的变化;TG、MDA、AST、ALT试剂盒检测细胞内TG含量、膜脂质过氧化及肝细胞的损伤情况。5.流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染检测肝细胞株L02细胞凋亡率;AO/EB染色法观察细胞凋亡形态;Western blot、RT—PCR法检测GRP78蛋白和mRNA的表达。结果1.用油酸、软脂酸分别成功诱导建立L02肝细胞株脂肪变性模型。油红O染色光学显微镜下观察:各时段对照组、DMSO组仅见少许橘红色脂滴,软脂酸各组的肝细胞均可见较多的橘红色脂滴,油酸各组的肝细胞可见大量橘红色脂滴,随培养时间延长更为显著,同时伴有脂滴融合现象。2.与对照组和DMSO组比较,软脂酸组、油酸组培养上清中的TG、MDA、AST、ALT逐渐升高(P<0.05)。3. AO/EB染色、ANNEXINⅤFITC/PI双染检测均显示:油酸组和软脂酸组的细胞凋亡率随培养时间延长逐渐升高,在48、72h时,二者与对照组和DMSO组比较,差异具有显著性;软脂酸组凋亡率高于油酸组,差异也具有显著性(P<0.05)。4. Western-blot、RT-PCR结果均显示:各组GRP78蛋白和mRNA均有不同程度的表达,但是,在24、48、72h时,软脂酸组的GRP78蛋白和mRNA表达均比对照组、DMSO组和油酸组明显增加(P<0.05)。结论1.不同性质的脂肪酸均可导致L02细胞发生以甘油三酯升高为特征的脂肪变性,软脂酸比油酸更易引起脂变肝细胞的转氨酶释放、MDA产生增加以及细胞凋亡,提示饱和脂肪酸的脂毒性更强。2.两种类型的脂肪酸均可引起不同程度的肝细胞凋亡。饱和脂肪酸可能通过上调葡萄糖调节蛋白78表达,启动内质网应激从而诱导脂肪变性的肝细胞凋亡,而油酸不能影响GRP78的表达。