Wharton’s jelly间质干细胞分化为胆碱能神经元的实验研究

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目的:利用神经干细胞条件培养基、骨形态发生蛋白4(bone morphogeneticprotein4, BMP4)和成纤维细胞生长因子8(fibroblast growth factor8, FGF8)诱导Wharton’s jelly间充质干细胞(Wharton’s jelly mesenchymal stem cells,WJ-MSCs)分化为胆碱能样神经元。方法:植块法提取WJ-MSCs;提取胚胎14天端脑神经干细胞,制备神经干细胞条件培养基;诱导时,10%胎牛血清DMEM-Ham’s F-12培养基培养WJ-MSCs1天,神经干细胞条件培养基培养半量换液培养2天,神经干细胞条件培养基全量培养7天,神经干细胞条件培养基、BMP4和FGF8联合诱导10天;诱导后,用免疫荧光双染法和RT-PCR技术检测胆碱乙酰基转移酶(cholineacetyltransferase, CHAT)、神经丝蛋白(neurofilament, NF)、Islet-1和Lhx8的表达,用乙酰胆碱检测试剂盒检测乙酰胆碱分泌情况。结果:诱导后,部分WJ-MSCs转变成根茎样细胞;免疫荧光双重染色检测到胆碱能神经元表型,即CHAT和NF阳性共表达,它们的mRNA也有阳性表达(P<0.01);分化的胆碱能神经元表型细胞可分泌乙酰胆碱(P<0.01);免疫荧光双重染色检测到,分化的胆碱能神经元表型细胞共表达胆碱能神经元发生时表达的转录因子lslet-1和Lhx8,二者的mRNA也有阳性表达(P<0.01)。结论:神经干细胞条件培养基、BMP4和FGF8可以诱导WJ-MSCs分化为胆碱能样神经元;分化的细胞表达胆碱能神经元表型CHAT和NF,可分泌Ach,表达胆碱能神经元发生时表达的关键转录因子lslet-1和Lhx8。
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