稻瘟病菌Rab蛋白功能研究

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Rab族蛋白是小G蛋白Ras家族最大的亚家族之一。研究表明它主要参与细胞内的囊泡运输,调节生物体内各种蛋白在细胞内外的正确运输和分配。为明确Rab族蛋白在稻瘟病菌等丝状真菌生长发育和侵染过程的作用,对稻瘟病菌Rab蛋白进行了生物信息学、基因表达和功能分析。生物信息学分析表明,在稻瘟病菌基因组中有11个Rab蛋白家族成员,这些Rab家族成员都具有其保守的结构域并且与其它物种间的Rab族蛋白存在着高度的同源性。荧光实时定量PCR分析表明,稻瘟病菌11个假定的Rab蛋白MoRab1、MoRab4、MoRab52、MoRab53和MGG07191相对于其它发育阶段,均是孢子发育阶段表达最高;MoRab6、MoRab7和MoSec4在菌丝发育阶段表达最高;MoRab51和MoRab8在芽管发育阶段表达最高;MGG01079附着胞阶段的表达量最高。本研究利用同源重组方法,获得一个MoRab51(Mgg01185.6)和MoRab7(Mgg08144.6)的基因敲除突变体。表型分析发现两个基因敲除突变体的气生菌丝较野生菌株明显减少,菌丝生长速度明显减慢,致病力丧失。Rab51敲除突变体分生孢子形成减少,而MoRab7的敲除突变体不形成分生孢子。MoRab7的敲除突变体菌丝块接种洋葱表皮可以形成附着胞,但无法成功侵入洋葱表皮细胞。以孢子悬浮液和菌丝块分别接种水稻叶片结果表明,MoRab51和MoRab7敲除突变体均失去了对水稻的致病能力。透射电子显微镜观察发现,MoRab51和MoRab7敲除突变体相对对照菌株WT细胞内部囊泡数目增多,变小。综上所述,稻瘟病菌MoRab51和MoRab7蛋白可能参与了稻瘟病菌极性生长相关蛋白的转运,该蛋白的缺失阻碍细胞的极性生长,表现为菌丝生长速度、产孢能力丧失,进一步导致其致病力丧失。
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