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第一部分急性胰腺炎大鼠血清ghrelin的变化及其与胰腺组织Cav1.2、Cav2.2表达的关系目的观察在急性胰腺炎(Acute Pancreatitis,AP)大鼠中血清ghrelin的变化,及其与胰腺组织Cav1.2(L型钙通道的一个亚型)和Cav2.2(N型钙通道)表达的关系。方法30只SD大鼠随机分为5组:正常组、急性水肿性胰腺炎(Acute Edematous Pancreatitis,AEP)组、AEP对照组、急性坏死性胰腺炎(Acute Necrotizing Pancreatitis,ANP)组和ANP对照组。AEP组大鼠使用腹腔内注射雨蛙肽(50μg/kg)方法诱导,每隔一小时注射一次,连续7次,而AEP对照组腹腔注射同等剂量的生理盐水对照。ANP组将4%牛磺胆酸钠溶液逆行注入胰胆管。ANP对照组仅开腹后翻动胰腺组织。造模完成后24小时处死大鼠,取胰腺组织进行病理学评分;采用免疫组化法检测大鼠胰腺组织内Cav1.2和Cav2.2的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定大鼠血清ghrelin、IL-1β和TNF-α水平。结果(1)AEP组大鼠光镜下见胰腺水肿、炎症细胞浸润,病理评分高于AEP对照组和正常组(P<0.05);ANP组大鼠胰腺明显坏死,光镜下见胰腺水肿、炎症细胞浸润、出血、坏死,病理评分均高于其余各组(P<0.05);(2)ANP组的血清ghrelin明显高于其他组(P<0.05),AEP组的血清ghrelin亦高于AEP对照组和正常组(P<0.05);(3)ANP组的血清IL-1β均明显高于其他组(P<0.05),其他各组之间无差异;(4)ANP组的血清TNF-α高于除了AEP组外的其他各组(P<0.05);(5)ANP组大鼠胰腺组织中Cav1.2和Cav2.2的IRS评分均高于其他各组(P<0.05),AEP组的IRS评分明显高于AEP对照组和正常组(P<0.05);(6)血清ghrelin含量与胰腺组织病理评分、血清IL-1β和胰腺组织Cav1.2 IRS、Cav2.2 IRS正相关(P<0.01)。结论ANP大鼠血清ghrelin、IL-1β、TNF-α的含量和胰腺组织的Cav 1.2、Cav2.2的表达升高,其血清ghrelin含量与胰腺组织病理评分、血清IL-1β和胰腺组织Cav1.2和Cav2.2的表达正相关;同时,血清ghrelin含量的升高可能与AP的严重程度有关。第二部分ghrelin对胰腺腺泡细胞内Cav1.2、Cav2.2表达的影响目的构建ghrelin基因过表达和干扰稳转AR42J细胞系,研究不同ghrelin基因表达对AR42J细胞中Cav1.2、Cav2.2和细胞内钙离子(Calcium Ion,[Ca2+]i)浓度的影响。方法(1)构建ghrelin基因过表达质粒p MD19T-simple-ghrelin及ghrelin基因干扰质粒p Lenti6.3-ghrelin-IRES-EGFP,以慢病毒为载体分别将ghrelin基因过表达质粒、干扰质粒转染至AR42J细胞,应用Western Blot方法分别检测ghrelin基因过表达和干扰稳转AR42J细胞中ghrelin蛋白的表达;(2)将AR42J细胞分为5组:过表达组(AR42J+ghrelin)、过表达阴性对照组(AR42J+ghrelin NC)、空白对照组(AR42J)、干扰阴性对照组(AR42J+ghrelin sh RNA NC)、干扰组(AR42J+ghrelin sh RNA),应用Western Blot方法分别检测各组细胞内Cav1.2和Cav2.2蛋白的表达;Fluo-4-am钙离子荧光探针标记联合激光共聚焦扫描显微镜(Laser Scanningconfocal Microscope,LSCM)测定各组细胞内的[Ca2+]i浓度。结果(1)干扰组(AR42J+ghrelin sh RNA)AR42J细胞的ghrelin蛋白低表达(P<0.05),而干扰阴性对照组(AR42J+ghrelin sh RNA NC)和空白对照组(AR42J)的ghrelin表达相近;反之,过表达组(AR42J+ghrelin)AR42J细胞的ghrelin蛋白高表达(P<0.05),而过表达阴性对照组(AR42J+ghrelin NC)和空白对照组(AR42J)的ghrelin表达相近;(2)与空白对照组(AR42J)对比,低表达组(AR42J+ghrelin sh RNA)细胞内Cav1.2、Cav2.2蛋白表达水平下降(P<0.05),而过表达组(AR42J+ghrelin)细胞内Cav1.2、Cav2.2蛋白表达水平升高(P<0.05);与空白对照组(AR42J)对比,低表达组(AR42J+ghrelin sh RNA)细胞内[Ca2+]i浓度下降(P<0.05),而过表达组(AR42J+ghrelin)细胞内[Ca2+]i浓度升高(P<0.05)。结论在胰腺腺泡细胞中,不同的ghrelin基因表达水平通过对Cav1.2和Cav2.2表达的影响改变了细胞内[Ca2+]i浓度。