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目的:通过分析各组肾小管上皮细胞中上皮细胞的损伤因子,探讨血管内皮细胞损伤后对肾小管上皮细胞缺氧损伤的影响,从而推断在急性缺血再灌注诱导的急性肾损伤(Acute Kidney Injury,AKI)中血管内皮的作用。方法:用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液、HUVEC用20%胎牛血清+1%双抗+0.03g/l ECGS+5ug/ml肝素+10mM L-谷氨酰胺的M199培养液,分别培养于37℃、5%CO2恒温培养箱中,根据细胞生长密度1:3比例传代。实验分组:对照组HK-2细胞单独培养于常氧环境(N0组)、HK-2单独培养于缺氧环境(H0组)、HK-2与未受损的HUVEC共培养于缺氧环境(H1组)、HK-2与预先受缺氧损伤的HUVEC共培养于缺氧环境(H2组);用免疫荧光法确定HUVEC预缺氧时间;蛋白印迹法检测HK-2细胞损伤指标E-cadherin、缺氧刺激产物诱导型一氧化氮合酶(iNOS),光镜学观察各组细胞生长情况。结果:免疫荧光法显示HUVEC缺氧24h后缺氧诱导因子HIF-1α入核;蛋白印迹法显示与N0组相比,H0组及H2组E-cadherin表达量明显减少,H0组减少约为N0组的40%(p<0.05),H2组减少约为N0组的90%(p<0.05);相对于N0组,H1组的表达量反而升高约为N0组的30%(p<0.05);而iNOS蛋白表达在H0组及H2组升高,且在H2升高的更显著,H0组较N0组约升高200%(p<0.05),H2组较H0组约升高40%(p<0.05);光镜下可见在H0、H2组悬浮细胞数明显多于N0及H1组。HE染色可见:N0组细胞核细胞质分明,细胞边界清楚;H0组细胞结构紊乱,细胞边界欠清晰;H1组细胞形态较完整;H2组细胞结构紊乱,胞核胞质无明显界限,又得细胞核甚至消失,细胞边界破碎。结论:受损的HUVEC细胞会释放某些物质诱导加重肾小管上皮细胞的缺氧损伤,而功能正常的HUVEC细胞可以增加肾小管上皮细胞间的连接,保护小管上皮细胞免受或者减轻其缺氧损害。